24小时热门版块排行榜    

查看: 2343  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么单酶切切不开

最近最转基因用的Super1300载体,选HindIII和Spe1 酶双酶切后和目的片段连接,但是总是空载,自连,没办法,单酶切验证发现Spe1酶切不开,HindIII没问题,可以确定不是酶的问题,因为用别人切其他质粒没问题的Spe1酶切的,但是切我的空载都不行,另外想着换 酶切位点,拿其他酶试了一下,也能切开,但是SpeI就是切不开,和空载的条带一样!一直弄不明白怎么回事,我用的NEB酶,看NEB目录说这个酶对甲基化并不敏感啊,怎么回事啊???谁能救救我!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

探究知识的海洋
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2298827423

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 070250035 at 2013-04-21 16:40:48
换了载体果然成功了!...

您是换了一管新的SP1300吗?我的为何换了几管都还是切不开?求回复,谢谢
9楼2016-08-14 17:34:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2013-04-11 17:21:33
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。
2楼2013-04-10 14:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体上面那个位点是不是被甲基化了?或者是缓冲液有问题?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-04-10 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-10 14:53:16
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。

40微升体系加了5微升质粒,酶加1.5微升,切不开啊,我用试剂盒提的质粒,应该没问题吧???是Spe1酶有什么特殊的么??
探究知识的海洋
4楼2013-04-11 09:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 4/200 2026-03-20 21:01 by zhukairuo
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
请填处理意见