24小时热门版块排行榜    

查看: 2707  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么单酶切切不开

最近最转基因用的Super1300载体,选HindIII和Spe1 酶双酶切后和目的片段连接,但是总是空载,自连,没办法,单酶切验证发现Spe1酶切不开,HindIII没问题,可以确定不是酶的问题,因为用别人切其他质粒没问题的Spe1酶切的,但是切我的空载都不行,另外想着换 酶切位点,拿其他酶试了一下,也能切开,但是SpeI就是切不开,和空载的条带一样!一直弄不明白怎么回事,我用的NEB酶,看NEB目录说这个酶对甲基化并不敏感啊,怎么回事啊???谁能救救我!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

探究知识的海洋
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 070250035 at 2013-04-11 09:42:08
40微升体系加了5微升质粒,酶加1.5微升,切不开啊,我用试剂盒提的质粒,应该没问题吧???是Spe1酶有什么特殊的么??...

确定质粒序列没有问题吗?会不会是突变了。
6楼2013-04-11 13:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2013-04-11 17:21:33
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。
2楼2013-04-10 14:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体上面那个位点是不是被甲基化了?或者是缓冲液有问题?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-04-10 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-10 14:53:16
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。

40微升体系加了5微升质粒,酶加1.5微升,切不开啊,我用试剂盒提的质粒,应该没问题吧???是Spe1酶有什么特殊的么??
探究知识的海洋
4楼2013-04-11 09:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金不中,共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见