| 查看: 7339 | 回复: 5 | ||
[求助]
质粒分别酶切均有正确条带，但双酶切只有一条条带，这是怎么回事？ 已有3人参与
|
我的片段长度为5400bp左右，连接到POK12载体，载体长度为2400bp。由于长片段连接太难，所以我将片段一分为二，分别为3200bp和2600bp。分别连接入pok中。再将两段连接起来。经PCR鉴定为阳性的菌液提取质粒进行酶切鉴定。片段1的双酶切为MluI和NdeI，片段2的双酶切为NdeI和EcoRV；同时使用MluI和EcoRV对整个片段进行酶切。第一行为片段1的双酶切，第二行为片段2的双酶切，均有目的条带，第三行为整个片段的酶切，但是没有pok质粒条带，只有单一的一条带，三个酶切使用的是同一个质粒，请问这是怎么回事？我到底是连上了还是没连上啊……请大家帮忙看一下分析一下其中的问题。Marker从上到下的大小为5000，3000，2000，1500，800，500，300 20150318-2.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有54人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 单酶切跟双酶切电泳条带一样，且都比空质粒跑的快，什么原因？
已经有7人回复
- pet28a 空质粒双酶切图像问题
已经有15人回复
- 质粒上的两个酶切位点紧挨着，双酶切能否切开
已经有6人回复
- 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
已经有49人回复
- pPIC9表达质粒XhoI/EcoRI双酶切
已经有7人回复
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢
已经有6人回复
- 求助：质粒酶切问题，质粒被切飞了啊！！
已经有24人回复
- 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对
已经有3人回复
- 双酶切后，质粒条带弥散
已经有13人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 连接效率低，重组质粒无法酶切
已经有5人回复
- 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？
已经有7人回复
- 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？
已经有13人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
- 质粒双酶切。。。。。。。
已经有5人回复
- 我构建质粒后酶切验证的问题
已经有13人回复
- 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！
已经有34人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
已经有16人回复
- 环形质粒酶切电泳图分析求解
已经有25人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 质粒DNA用EcoR1和HindⅢ双酶切后电泳图，求鉴
已经有6人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】质粒，酶切前比酶切后跑的还快，神了？？！！！
已经有15人回复
- 【求助/交流】质粒单酶切后竟然两条带
已经有32人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
whdxhxy
木虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2579.7
- 红花: 3
- 帖子: 243
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 849991
- 注册: 2009-09-17
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤化学药物治疗
2楼2015-03-18 20:57:19
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2015-03-18 23:54:57
4楼2015-03-19 09:12:51
lomis
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 1766.8
- 散金: 420
- 红花: 25
- 帖子: 896
- 在线: 369.2小时
- 虫号: 1884761
- 注册: 2012-07-09
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-19 15:31:26
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-19 15:31:26
|
Double Digest Recommendations for MluI + NdeI: Digest in NEBuffer 3.1 at 37°C. 如果用NEB的酶，以后双酶切，先在以下网站找用哪个buffer. http://international.neb.com/too ... ouble-digest-finder 如果换成Fermentas的酶，是只有一个buffer的，就不用担心双酶切buffer不合适。 |
5楼2015-03-19 11:25:35
whdxhxy
木虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2579.7
- 红花: 3
- 帖子: 243
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 849991
- 注册: 2009-09-17
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤化学药物治疗
6楼2015-03-19 14:27:47
