应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我构建质粒后酶切验证的问题
141/1返回列表
查看: 2906  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rainbow8

新虫 (小有名气)

[交流] 我构建质粒后酶切验证的问题

大家好，我构建一个质粒载体处理过后待连接的长度是4.9kb，片段待连接的长度是3.5k 连接后我用片段上的两个单酶切位点双酶切，正常验证结果是6.7k和1.7k两个片段 可是我1.7k的条带对了 6.7k的条带与marker比像是只有5k多，不知道这是怎么回事，如果没连接上应该双酶切没有条带的，既然连接上了怎么大片段像是少了1kb
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-09-21 13:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你拿去测序不就行了，有时候可能是跑胶的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-21 13:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
最好送去测序，有的时候跑胶并不能准确的判断其大小，只是估算一下。而且一般MARKER也没那么准确。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-21 13:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你用其他酶切一下，看看是不是质粒大小就有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-21 14:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-09-23 14:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乱舞成影

金虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
重新提质粒，一部分做个PCR 另一部分再次用你的那两个酶双酶切。
如果你的跑胶图只有你那1.7和5k的两条带。那就不是酶切位点的问题，可能是你构建的质粒本身的问题了。供参考！
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-23 14:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小神龙198901

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
对…跑胶是有可能出问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-23 15:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudou588588

铁虫 (初入文坛)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
与结构有关  大片段的电泳不是精确    酶切验证准确

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-23 16:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
楼主载体里面不会有酶切位点吧
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-23 21:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
1）单酶切看下总长对不对；2）测序；
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-24 10:57:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houchm0927

金虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
前几天构建载体有类似情况。PCR检测正常，提质粒双酶切也可以切下正确大小的片段，只是载体大小减半了，送去测序也测不出来！我就重新做了，后来就好了。我觉得直接重做得了，有时候这种偶然意外真的很难找原因，当然楼主送去测序看看也好，祝好运。
赞一下 回复此楼
11楼2012-09-24 19:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1：楼主干嘛不用你连接表达载体时候设计的两个酶切位点切，这样直接切出目的条带跟载体，还能验证目的片段中是不是有设计了的酶切位点.
2：一条比Marker少了1000多，可能的原因是电泳问题，总感觉超过5000后，Marker都只能是参考，估算一下而已
3：有多出的酶切位点，把你那一条再一次酶切出1000多的片段
PS：送测序吧……
赞一下 回复此楼
12楼2012-09-25 08:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Happy实验室

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是没有连接完全，建议你最好在目的基因和载体上都选择一个位点，这样可靠一些
赞一下 回复此楼
13楼2012-10-02 23:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi20092

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
查一下片段内部有没有你用的酶切位点，另外测序。
赞一下 回复此楼
14楼2012-10-04 12:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainbow8 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天大化工（085600）调剂总分338 +6 蔡大美女 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿郑大070303，338分，求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭