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rainbow8

新虫 (小有名气)

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[交流] 我构建质粒后酶切验证的问题

大家好，我构建一个质粒载体处理过后待连接的长度是4.9kb，片段待连接的长度是3.5k 连接后我用片段上的两个单酶切位点双酶切，正常验证结果是6.7k和1.7k两个片段可是我1.7k的条带对了 6.7k的条带与marker比像是只有5k多，不知道这是怎么回事，如果没连接上应该双酶切没有条带的，既然连接上了怎么大片段像是少了1kb

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1楼2012-09-21 13:17:22

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Marado

金虫 (正式写手)

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1：楼主干嘛不用你连接表达载体时候设计的两个酶切位点切，这样直接切出目的条带跟载体，还能验证目的片段中是不是有设计了的酶切位点.
2：一条比Marker少了1000多，可能的原因是电泳问题，总感觉超过5000后，Marker都只能是参考，估算一下而已
3：有多出的酶切位点，把你那一条再一次酶切出1000多的片段
PS：送测序吧……