应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我构建质粒后酶切验证的问题
141/1返回列表
查看: 3465  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rainbow8

新虫 (小有名气)

[交流] 我构建质粒后酶切验证的问题

大家好，我构建一个质粒载体处理过后待连接的长度是4.9kb，片段待连接的长度是3.5k 连接后我用片段上的两个单酶切位点双酶切，正常验证结果是6.7k和1.7k两个片段 可是我1.7k的条带对了 6.7k的条带与marker比像是只有5k多，不知道这是怎么回事，如果没连接上应该双酶切没有条带的，既然连接上了怎么大片段像是少了1kb
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-09-21 13:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你拿去测序不就行了，有时候可能是跑胶的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-21 13:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
最好送去测序，有的时候跑胶并不能准确的判断其大小，只是估算一下。而且一般MARKER也没那么准确。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-21 13:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你用其他酶切一下，看看是不是质粒大小就有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-21 14:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-09-23 14:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乱舞成影

金虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
重新提质粒，一部分做个PCR 另一部分再次用你的那两个酶双酶切。
如果你的跑胶图只有你那1.7和5k的两条带。那就不是酶切位点的问题，可能是你构建的质粒本身的问题了。供参考！
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-23 14:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小神龙198901

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
对…跑胶是有可能出问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-23 15:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudou588588

铁虫 (初入文坛)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
与结构有关  大片段的电泳不是精确    酶切验证准确

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-23 16:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
楼主载体里面不会有酶切位点吧
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-23 21:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
1）单酶切看下总长对不对；2）测序；
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-24 10:57:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houchm0927

金虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
前几天构建载体有类似情况。PCR检测正常，提质粒双酶切也可以切下正确大小的片段，只是载体大小减半了，送去测序也测不出来！我就重新做了，后来就好了。我觉得直接重做得了，有时候这种偶然意外真的很难找原因，当然楼主送去测序看看也好，祝好运。
赞一下 回复此楼
11楼2012-09-24 19:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1：楼主干嘛不用你连接表达载体时候设计的两个酶切位点切，这样直接切出目的条带跟载体，还能验证目的片段中是不是有设计了的酶切位点.
2：一条比Marker少了1000多，可能的原因是电泳问题，总感觉超过5000后，Marker都只能是参考，估算一下而已
3：有多出的酶切位点，把你那一条再一次酶切出1000多的片段
PS：送测序吧……
赞一下 回复此楼
12楼2012-09-25 08:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Happy实验室

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是没有连接完全，建议你最好在目的基因和载体上都选择一个位点，这样可靠一些
赞一下 回复此楼
13楼2012-10-02 23:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi20092

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
查一下片段内部有没有你用的酶切位点，另外测序。
赞一下 回复此楼
14楼2012-10-04 12:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainbow8 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭