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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我构建质粒后酶切验证的问题
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rainbow8

新虫 (小有名气)

[交流] 我构建质粒后酶切验证的问题

大家好，我构建一个质粒载体处理过后待连接的长度是4.9kb，片段待连接的长度是3.5k 连接后我用片段上的两个单酶切位点双酶切，正常验证结果是6.7k和1.7k两个片段 可是我1.7k的条带对了 6.7k的条带与marker比像是只有5k多，不知道这是怎么回事，如果没连接上应该双酶切没有条带的，既然连接上了怎么大片段像是少了1kb
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1楼2012-09-21 13:17:22
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houchm0927

金虫 (小有名气)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
前几天构建载体有类似情况。PCR检测正常，提质粒双酶切也可以切下正确大小的片段，只是载体大小减半了，送去测序也测不出来！我就重新做了，后来就好了。我觉得直接重做得了，有时候这种偶然意外真的很难找原因，当然楼主送去测序看看也好，祝好运。
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11楼2012-09-24 19:39:45
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tupac225

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你拿去测序不就行了，有时候可能是跑胶的问题。
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2楼2012-09-21 13:27:59
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gelois

金虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
最好送去测序，有的时候跑胶并不能准确的判断其大小，只是估算一下。而且一般MARKER也没那么准确。
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3楼2012-09-21 13:33:54
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
你用其他酶切一下，看看是不是质粒大小就有问题。
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4楼2012-09-21 14:51:34
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