应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌ET12567
91/1返回列表
查看: 2172  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者芥末蚕豆将赠送您 2 个金币

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌ET12567

我将构建好的一个质粒转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态，菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确，将验证正确的菌用20％甘油保存在－20度；
      此时问题出现了：将甘油保藏管菌液重新接LB小试管（含抗性），提质粒，但是此时却见不到质粒的条带了，Why？（ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的，应该没问题；LB小试管菌长得很好很正常）。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB（含同样抗生素）平板活化，然后再接小试管提质粒，结果电泳也没见到我所要的质粒条带（PS：电泳和别人一起跑的，别人的有条带，电泳应该是没问题的）
有没有高手比较连接这个菌种！非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好！
1楼2011-09-20 00:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 08:02:16
是不是保存的时候出问题了，比如保存前的菌培养没加抗生素，质粒丢失了或染菌了。。。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-09-20 07:26:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
应该不是保存的问题，之后我重新保存过好几次，抗生素应该也是没错的，大家都没有问题！染菌也不像！
赞一下 回复此楼
开心就好！
3楼2011-09-20 08:52:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-09-20 18:06:28
那你质粒有么有保存？重新导入回去也是可以的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-20 14:29:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 我们用的很高，-20度用50%的甘油…… 2011-09-20 18:07:05
引用回帖:
1楼: Originally posted by 芥末蚕豆 at 2011-09-20 00:14:57:
我将构建好的一个质粒转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态，菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确，将验证正确的菌用20％甘油保存在－20度；
      此时问题出现了：将甘油保藏管菌液重新接LB小 ...

好像有说甘油浓度太高会导致质粒不稳定的，我一般都用8%的甘油浓度保菌的！会不会是你的甘油浓度太大了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-09-20 14:40:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by friya0910 at 2011-09-20 14:40:18:
好像有说甘油浓度太高会导致质粒不稳定的，我一般都用8%的甘油浓度保菌的！会不会是你的甘油浓度太大了。

是吗？还有这样的说法啊？我试试看！也有说是安普霉素浓度有点低，我也在增加！都试试看吧！非常感谢大家都我的帮助！
赞一下 回复此楼
开心就好！
6楼2011-09-20 18:26:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-21 07:53:37
那就不要保存 菌液了 保存质粒啊  质粒好保存 用的时候重新转化不就ok
赞一下(1人) 回复此楼
冷风过心变热
7楼2011-09-20 21:49:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张玉杰

铜虫 (初入文坛)
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-02-22 18:36:30
引用回帖:
1楼: Originally posted by 芥末蚕豆 at 2011-09-20 00:14:57:
我将构建好的一个质粒转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态，菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确，将验证正确的菌用20％甘油保存在－20度；
      此时问题出现了：将甘油保藏管菌液重新接LB小 ...

ET12567中含有核酸酶，很容易讲解质粒DNA。你的重组质粒可能就是被降解了，我也出现过跟你一样的情况。后来我又重做的连接、转化。
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-22 17:00:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

仇峰12306

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 芥末蚕豆 at 2011-09-20 18:26:07
是吗？还有这样的说法啊？我试试看！也有说是安普霉素浓度有点低，我也在增加！都试试看吧！非常感谢大家都我的帮助！...

能问个问题吗？我现在用安普质粒导到DH5a里不长，这个质粒是之前老师给的，想问你安普导入的大肠是什么菌啊？
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-17 08:52:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芥末蚕豆 的主题更新
91/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我标书代码变了 +39 学员NHuqdk 2024-06-16 53/2650 2024-06-17 12:35 by leeeru
[找工作] 初始合伙人来啦！（生物试剂耗材标准品） +10 欢快的小科研人 2024-06-15 16/800 2024-06-17 12:02 by like_2005
[公派出国] 去英国的小伙伴儿都在哪儿租的房子呀？ +3 65syn 2024-06-14 4/200 2024-06-17 11:24 by 爱吃菜的虫
[基金申请] 2024国社科通讯评审 +10 qsd10086 2024-06-13 18/900 2024-06-17 09:22 by swywp
[找工作] 成都产品质量检测研究院 200+3 鲸鱼663 2024-06-11 10/500 2024-06-17 08:31 by yudaoqian88
[基金申请] F口信息学部拿面上，大概需要什么样的成果 +5 _奋黎_ 2024-06-16 7/350 2024-06-17 07:22 by yp_nupt
[有机交流] 车间生产，真空度很高，温度很高，但减压蒸馏速度很慢。 10+12 召唤鬼泣lL 2024-06-13 37/1850 2024-06-17 02:17 by xmclyn
[教师之家] 每次骚扰女学生的都是院系领导，而不是普通教师，小编们要注意措辞正确 +9 zju2000 2024-06-15 11/550 2024-06-16 14:49 by appleapple2
[找工作] 杭电、天津科技、青农和宁波工程学院如何选？ +11 味道很好啊 2024-06-13 21/1050 2024-06-16 13:57 by wanglongzh
[基金申请] 博后基金，博管会会提前知道消息吗？ +4 yuyiang 2024-06-13 4/200 2024-06-16 11:40 by yangyuzhong4
[论文投稿] 投稿被一个审稿人恶意评审了怎么样？ +5 1chen 2024-06-14 7/350 2024-06-15 23:15 by xy66xy
[文学芳草园] 累并快乐着 +13 MYHLD521 2024-06-14 13/650 2024-06-15 22:59 by zeolitess
[基金申请] 博后面上今天有bug可以看到是否资助？ +20 lyfbangong 2024-06-12 31/1550 2024-06-15 21:18 by since—2010
[考博] 上海交大招收材料化学方向科研助理/“申请考核”博士（请勿回复帖子或站内投条） +3 灵梦and紫 2024-06-12 4/200 2024-06-15 20:58 by 1822836277
[基金申请] 为什么我的博后基金还在流动站审核中？不会是学院给我卡了吧？ +14 王凯12 2024-06-13 26/1300 2024-06-15 15:22 by 好人与坏人
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[论文投稿] 投稿kbs被拒后，系统提供的推荐的其他期刊有用吗？ +3 chenrui2015 2024-06-10 3/150 2024-06-14 10:30 by Tr.sjx1997
[论文投稿] 文章proof要求使用机构的邮箱 5+3 不可不信缘 2024-06-11 11/550 2024-06-14 07:00 by 3001160025
[硕博家园] 考博应该从哪里开始准备 +6 亮姐2019 2024-06-11 8/400 2024-06-13 12:53 by 帕秋莉GO
[硕博家园] 申博 +3 悦悦小小鱼 2024-06-12 3/150 2024-06-12 15:11 by chen5805
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭