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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌ET12567

我将构建好的一个质粒转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态,菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确,将验证正确的菌用20%甘油保存在-20度;
      此时问题出现了:将甘油保藏管菌液重新接LB小试管(含抗性),提质粒,但是此时却见不到质粒的条带了,Why?(ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的,应该没问题;LB小试管菌长得很好很正常)。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB(含同样抗生素)平板活化,然后再接小试管提质粒,结果电泳也没见到我所要的质粒条带(PS:电泳和别人一起跑的,别人的有条带,电泳应该是没问题的)
有没有高手比较连接这个菌种!非常感谢!
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开心就好!
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-09-20 18:06:28
那你质粒有么有保存?重新导入回去也是可以的。
4楼2011-09-20 14:29:14
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 08:02:16
是不是保存的时候出问题了,比如保存前的菌培养没加抗生素,质粒丢失了或染菌了。。。。。。
2楼2011-09-20 07:26:31
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

应该不是保存的问题,之后我重新保存过好几次,抗生素应该也是没错的,大家都没有问题!染菌也不像!
开心就好!
3楼2011-09-20 08:52:05
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 我们用的很高,-20度用50%的甘油…… 2011-09-20 18:07:05
引用回帖:
1楼: Originally posted by 芥末蚕豆 at 2011-09-20 00:14:57:
我将构建好的一个质粒转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态,菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确,将验证正确的菌用20%甘油保存在-20度;
      此时问题出现了:将甘油保藏管菌液重新接LB小 ...

好像有说甘油浓度太高会导致质粒不稳定的,我一般都用8%的甘油浓度保菌的!会不会是你的甘油浓度太大了。
5楼2011-09-20 14:40:18
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