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857071522

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助】大肠杆菌的测定

本人最近在用涂布分离法测定河水和井水的大肠杆菌,有几个问题想请教一下各位高手。
一、使用涂布环是否会使测出的大肠杆菌数偏小?(涂布完后会沾有少量菌液)
二、书上配制培养基的步骤是先过滤再加乳糖,为什么?可否反过来?
三、培养一两天后,培养基有时会产生大量水,请问是什么原因?
四、一个培养皿倒多少培养基合适,或者说培养基厚度多少合适?
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jennydersiry

金虫 (小有名气)



gaofeng925(金币+1): 积极 2011-01-24 12:34:31
857071522(金币+5): 谢谢,你的回答很详细! 2011-01-24 15:31:39
一:涂布环所产生的菌数误差不会超过一个数量级,因为涂布法本来就不是十分准确的计数方法,同一个数量级内的菌数,例如1500和2000,我们认为是一样的,所以涂布环的误差可忽略不计
二:我们配制计数培养基时没有采用过滤,所以我个人认为没有影响
三:培养基蒸发产生水是正常现象,但如果量过大要注意,培养温度过高会使培养基中的水过度蒸发
四:15-20ml左右
2楼2011-01-24 10:38:26
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857071522

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by jennydersiry at 2011-01-24 10:38:26:
一:涂布环所产生的菌数误差不会超过一个数量级,因为涂布法本来就不是十分准确的计数方法,同一个数量级内的菌数,例如1500和2000,我们认为是一样的,所以涂布环的误差可忽略不计
二:我们配制计数培养基时没有 ...

我是在37摄氏度培养大肠杆菌,这个温度是否高?大肠杆菌分解培养基是否会产生水?
4楼2011-01-24 15:37:47
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jennydersiry

金虫 (小有名气)



stormxuhao(金币+1): 积极 2011-01-25 12:20:38
857071522(金币+2): 谢谢! 2011-01-25 16:26:56
这个温度是合适的,我们一般也用35度左右

我们并没有发现大肠杆菌的培养基会有大量产水的情况,希望你提供更多的信息,我们一起探讨:
1 你的平板是否在培养皿和培养基完全冷却后涂布的?若你在培养基和平板还温热的状态下进行涂布,培养基蒸发并冷凝会产生一定量的水
2 若你的水是在培养过程中产生的,是你每一个样品都产生,还是偶尔发现?我个人认为,大肠杆菌是兼性厌氧菌,在氧气浓度高的环境里进行有氧呼吸,代谢产物会产生水,氧气浓度低的环境里不会产水,当然这是我的猜测,你可以对培养皿进行密封包裹进行进一步验证

[ Last edited by jennydersiry on 2011-1-25 at 12:10 ]
5楼2011-01-25 12:09:36
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857071522

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by jennydersiry at 2011-01-25 12:09:36:
这个温度是合适的,我们一般也用35度左右

我们并没有发现大肠杆菌的培养基会有大量产水的情况,希望你提供更多的信息,我们一起探讨:
1 你的平板是否在培养皿和培养基完全冷却后涂布的?若你在培养基和平板还 ...

涂布时是等培养皿和培养基完全冷却的,但我发现,在趁热倒培养基到培养基完全冷却这段时间,培养皿盖上会凝结一些水。这应该是水来源的一部分。至于你说的大肠杆菌是兼性厌氧菌,理论上应该是成立的,不过我没试过。  在顺便问一下,你们计数时是如何数的?结果如何表示?
6楼2011-01-25 16:01:24
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jennydersiry

金虫 (小有名气)



stormxuhao(金币+1): 积极 2011-01-27 07:27:18
857071522(金币+2): 谢谢你的耐心解答 2011-01-27 20:44:06
引用回帖:
Originally posted by 857071522 at 2011-01-25 16:01:24:

涂布时是等培养皿和培养基完全冷却的,但我发现,在趁热倒培养基到培养基完全冷却这段时间,培养皿盖上会凝结一些水。这应该是水来源的一部分。至于你说的大肠杆菌是兼性厌氧菌,理论上应该是成立的,不过我没试 ...

我们将其稀释成不同的梯度,涂布培养后选取菌落数在30-100的梯度进行计数,计数就是把明显的菌落用黑笔在背面点个点,查点就行,计数结果乘以稀释倍数,单位用cfu/ml表示,因误差较大,可做多个平行样

另外,若水只是凝结在培养皿盖上,没有大量流出,就是培养过程中培养基蒸发出的水,可不必考虑影响

[ Last edited by jennydersiry on 2011-1-26 at 19:26 ]
7楼2011-01-26 19:21:17
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Linwenshi

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
TonyGeN: 金币+1, 交流积极 欢迎常来 2012-08-15 21:51:43
倒培养皿大概25ml,厚度4mm就可以。。培养的温度是35±1°C
8楼2012-08-15 19:33:50
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wangyanlinx

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
609953楼: Originally posted by jennydersiry at 2011-01-26 19:21:17
我们将其稀释成不同的梯度,涂布培养后选取菌落数在30-100的梯度进行计数,计数就是把明显的菌落用黑笔在背面点个点,查点就行,计数结果乘以稀释倍数,单位用cfu/ml表示,因误差较大,可做多个平行样

另外, ...

请问如果一个平板的菌落数是100 那乘以稀释倍数假设10000 那么这个最终浓度是谁的浓度? 就是这个稀释度的浓度吗?还是说没有稀释时的浓度  也就是你取得菌的最大浓度?可能没表达明白  希望你先帮我解决一下 急啊 不懂
9楼2012-11-08 14:55:29
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helo

铜虫 (小有名气)


学习一下
10楼2012-11-08 18:58:39
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jennydersiry

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1624011楼: Originally posted by wangyanlinx at 2012-11-08 14:55:29
请问如果一个平板的菌落数是100 那乘以稀释倍数假设10000 那么这个最终浓度是谁的浓度? 就是这个稀释度的浓度吗?还是说没有稀释时的浓度  也就是你取得菌的最大浓度?可能没表达明白  希望你先帮我解决一下 急啊 ...

如果一个平板的菌落数是100 ,那么这是0.1ml稀释液里的菌落数(假设你涂布时用的是0.1ml菌液),稀释倍数假设10000,那么未稀释液里的菌落数应是100*10*10000个每毫升,不知你能明白否
11楼2012-11-09 10:24:22
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简单回复
zyxme3楼
2011-01-24 11:19   回复  
gaofeng925: 不要纯表 2011-01-24 12:34:42
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