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新虫 (小有名气)

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[求助] 如何测定培养基中的残糖含量

我在大肠杆菌的培养中用葡萄糖做碳源，然后想测定一下葡萄糖的残量，有没有相关童鞋测定过的？寻求比较简单方便的办法。。之前看的文献中的使用仪器都太复杂了。。。

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1楼2011-11-03 09:37:47

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+6): 鼓励新虫~~~谢谢交流 2011-11-06 02:03:35

1 葡萄糖测定
（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
小烧杯取分析纯葡萄糖置于烘干箱中烘干至，于分析天平中准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖10mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至10mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将 6.3g DNS （分析天平中称取于小烧杯）和262mL 2M NaOH 溶液（大量筒称取250ml+小量筒称取12ml），加到500mL（量杯量取）含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中（在微波炉中加热1min溶解），再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

1．制作葡萄糖标准曲线
取 7 支10mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

      1mg/ml葡萄糖标准溶液蒸馏水    DNS    葡萄糖含量    光密度值
管号          （ml）          （ml）    （ml）    （mg/ml）    （OD540）
0             0                1       0.75       0
1             0.1             0.9       0.75       0.01
2             0.2             0.8       0.75       0.02
3             0.3             0.7       0.75       0.03
4             0.4             0.6       0.75       0.04
5             0.5             0.5       0.75       0.05
6             0.6             0.4       0.75       0.06

将各管摇匀，取试管架置于水浴锅中，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色（分光光度计预热20分钟）。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。