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水红蓝调新虫 (小有名气)
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[求助]
如何测定培养基中的残糖含量
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| 我在大肠杆菌的培养中用葡萄糖做碳源，然后想测定一下葡萄糖的残量，有没有相关童鞋测定过的？寻求比较简单方便的办法。。之前看的文献中的使用仪器都太复杂了。。。 |
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【答案】应助回帖
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scelab(金币+6): 鼓励新虫~~~谢谢交流 2011-11-06 02:03:35
scelab(金币+6): 鼓励新虫~~~谢谢交流 2011-11-06 02:03:35
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1 葡萄糖测定 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液 小烧杯取分析纯葡萄糖置于烘干箱中烘干至，于分析天平中准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖10mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至10mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将 6.3g DNS （分析天平中称取于小烧杯）和262mL 2M NaOH 溶液（大量筒称取250ml+小量筒称取12ml），加到500mL（量杯量取） 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中（在微波炉中加热1min溶解），再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 1． 制作葡萄糖标准曲线 取 7 支10mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 1mg/ml葡萄糖标准溶液 蒸馏水 DNS 葡萄糖含量 光密度值 管号 （ml） （ml） （ml） （mg/ml） （OD540） 0 0 1 0.75 0 1 0.1 0.9 0.75 0.01 2 0.2 0.8 0.75 0.02 3 0.3 0.7 0.75 0.03 4 0.4 0.6 0.75 0.04 5 0.5 0.5 0.75 0.05 6 0.6 0.4 0.75 0.06 将各管摇匀，取试管架置于水浴锅中，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色（分光光度计预热20分钟）。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 |
18楼2011-11-05 14:39:30