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【求助】求助：测定中药酸水解液中鼠李糖的含量？ 已有3人参与
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我用的是waters High-Performance Carbohydrate糖柱测定中药酸水解液中鼠李糖的含量,流动相为乙腈:水(70:30),第一次做的时候对照品,鼠李糖都呈单峰(虽然峰形较宽, 不好),但到第二次的时候再测对照品时,已呈明显双峰(未完全分开),对照品是用纯水配制的.另外样品的也是呈双峰. 我起初怀疑是鼠李糖对照品不纯(用的是鉴别用的),但为何第一次又不成双峰呢?怀疑是鼠李糖不稳定分解了?但好像鼠李糖在水中应该是很稳定的吧? 不知道是什么原因?急求各位老师指点一下!!急! |
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2楼2009-11-01 18:03:19
elvajack
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检测原理：表面活性剂糖脂分子结构中含有五碳糖，在热浓硫酸的作用下，脱水生成糖醛类化合物，糖醛类化合物与酚类化合物（3，5—二羟基甲苯、苔黑酚）反应，缩合生成有色物质，在可见波长421nm处有最大吸收峰，在标准曲线上确定相应的糖脂浓度，以此进行生物表面活性剂的定量分析。 方法一、3，5—二羟基甲苯—硫酸法 将培养液离心后，取0.2ml酸化上清液，用1.0ml乙醚抽提三次，合并提取液，蒸发掉乙醚，加1.0ml0.05mmol/LNaHCO3溶液溶解，加1.8ml质量分数ω=0.19%3，5—二羟基甲苯(溶解在53%SO4中)，在80℃加热30min，然后室温冷却15min于421nm处比色定量。 方法二、苔黑酚反应 将发酵液1ml+9ml苔黑酚的硫酸混合液（60%硫酸和1.6%苔黑酚按5：1混合），混合后于80℃恒温30min，然后冷却15min，于421nm测定吸光度。标准品按一定浓度梯度稀释按上述方法同样测定，制作标准曲线，从而确定糖脂的浓度。 方法三、蒽酮法 将5ml发酵液+10ml乙酸乙酯混匀，萃取，取溶剂层0.05ml到试管中；用N2流除去干扰蒽酮显色的溶剂；加入1ml蒸馏水和5ml0.2%蒽酮硫酸溶液（硫酸/水=75%）显色剂；在沸水中加热10min，冷却后在620nm下测定OD值对照标准曲线得到对应的糖脂含量。 方法四 100℃显色15 min,苯酚用量1.0 mL,硫酸用量5.0 mL,于482nm处测定.结果表明,用此方法测定鼠李糖脂 |
3楼2009-11-01 18:21:04
fujiugaofe
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