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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何测定培养基中的残糖含量
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水红蓝调

新虫 (小有名气)

[求助] 如何测定培养基中的残糖含量

我在大肠杆菌的培养中用葡萄糖做碳源，然后想测定一下葡萄糖的残量，有没有相关童鞋测定过的？寻求比较简单方便的办法。。之前看的文献中的使用仪器都太复杂了。。。
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1楼 2011-11-03 09:37:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

毛桃就是我

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+6): 鼓励新虫~~~谢谢交流 2011-11-06 02:03:35
1 葡萄糖测定
（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
小烧杯取分析纯葡萄糖置于烘干箱中烘干至，于分析天平中准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖10mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至10mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将 6.3g DNS （分析天平中称取于小烧杯）和262mL 2M NaOH 溶液（大量筒称取250ml+小量筒称取12ml），加到500mL（量杯量取） 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中（在微波炉中加热1min溶解），再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

1． 制作葡萄糖标准曲线
取 7 支10mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

        1mg/ml葡萄糖标准溶液   蒸馏水      DNS      葡萄糖含量      光密度值
管号           （ml）            （ml）     （ml）       （mg/ml）       （OD540）
0              0                 1          0.75         0
1              0.1               0.9        0.75         0.01
2              0.2               0.8        0.75         0.02
3              0.3               0.7        0.75         0.03
4              0.4               0.6        0.75         0.04
5              0.5               0.5        0.75         0.05
6              0.6               0.4        0.75         0.06

将各管摇匀，取试管架置于水浴锅中，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色（分光光度计预热20分钟）。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
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木有签名呀！
18楼2011-11-05 14:39:30
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-04 08:37:02
在大肠杆菌生长至对数生长末期至稳定期时，离心，过0.22 um膜。取不含菌体的滤出液用三五二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量。

仅供参考。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-03 10:13:13
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jpp9898

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-04 08:37:10
测定还原糖的标准方法是DNS法，需要的仅仅是DNS试剂（需要自己配制），一台水浴锅，一台紫外分光光度计！做标准曲线然后测定就行了！！
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梦想有多大，舞台就有多大
3楼2011-11-03 10:37:52
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含笑天天

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-04 08:37:19
上面两位同学说的很对，标准又简单的方法就是DNS法
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虫虫虫虫
4楼2011-11-03 20:29:08
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水红蓝调

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-03 10:13:13:
在大肠杆菌生长至对数生长末期至稳定期时，离心，过0.22 um膜。取不含菌体的滤出液用三五二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量。

仅供参考。

可以详细地讲一下吗？
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5楼2011-11-03 22:27:35
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水红蓝调

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jpp9898 at 2011-11-03 10:37:52:
测定还原糖的标准方法是DNS法，需要的仅仅是DNS试剂（需要自己配制），一台水浴锅，一台紫外分光光度计！做标准曲线然后测定就行了！！

有相关的资料吗？
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6楼2011-11-03 22:28:23
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水红蓝调

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 含笑天天 at 2011-11-03 20:29:08:
上面两位同学说的很对，标准又简单的方法就是DNS法

比斐林法还简单吗？
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7楼2011-11-03 22:29:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 水红蓝调 at 2011-11-03 22:27:35:
可以详细地讲一下吗？

难道你觉得这个还不够详细么？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2011-11-03 22:30:15
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含笑天天

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励 2011-11-04 08:37:30
引用回帖:
7楼: Originally posted by 水红蓝调 at 2011-11-03 22:29:20:
比斐林法还简单吗？

菲林法要滴定，肉眼判断实验终点，个人感觉不准，而且反应所需的亚铁氰化钾虽然没毒，但是在沸腾状态下反应，估计会分解释放氰化钾，毒性比较大，DNS法比较经典，稳定性好，建议使用
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虫虫虫虫
9楼2011-11-03 22:46:40
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匿名

用户注销 (知名作家)
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-04 08:37:39
本帖仅楼主可见
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10楼2011-11-04 08:12:54
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