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韩元富豪

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[求助] 质粒上的两个酶切位点紧挨着，双酶切能否切开已有4人参与

我的质粒上的两个酶切位点是Pst I （平末端）和 Sma I（粘性末端），两个位点是紧挨着，酶是Thermo 的酶，Buffer 是通用性的，双酶切能切开吗，不过不能，怎样做才能切开呀

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1楼 2014-07-06 12:10:54

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2楼2014-07-06 12:36:05

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韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:50

应该可以切的开，建议分两次切，不要在同一管中同时进行~

3楼2014-07-06 12:48:16

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zh10246

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韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:58

顺序切吧，位点没有重叠就可以

4楼2014-07-06 13:30:16

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gyesang

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【答案】应助回帖

这种情况，建议先用SmaI切两个小时，然后再加入PstI再酶切两个小时

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com

5楼2014-07-16 13:25:38

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gangnoon

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【答案】应助回帖

个人觉得，用NEB的酶切过夜，是可以切开的。我曾经一个8K的片段，双酶切位点间只有20几个Kb，我同时单双酶切过夜后再连接，然后测序，OK

6楼2014-12-08 18:11:24

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fanfenggui

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实验做完了吗？能告知，紧挨着的两个内切酶怎么切的吗？谢谢~

爱由心起！

7楼2020-06-19 11:45:08

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