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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒上的两个酶切位点紧挨着，双酶切能否切开
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒上的两个酶切位点紧挨着，双酶切能否切开 已有4人参与

我的质粒上的两个酶切位点是Pst I （平末端）和 Sma I（粘性末端），两个位点是紧挨着，酶是Thermo 的酶，Buffer 是通用性的，双酶切能切开吗，不过不能，怎样做才能切开呀
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1楼 2014-07-06 12:10:54
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
单酶切试一试

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
2楼2014-07-06 12:36:05
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:50
应该可以切的开，建议分两次切，不要在同一管中同时进行~
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3楼2014-07-06 12:48:16
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:58
顺序切吧，位点没有重叠就可以
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4楼2014-07-06 13:30:16
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

这种情况，建议先用SmaI切两个小时，然后再加入PstI再酶切两个小时
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-07-16 13:25:38
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gangnoon

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人觉得，用NEB的酶切过夜，是可以切开的。我曾经一个8K的片段，双酶切位点间只有20几个Kb，我同时单双酶切过夜后再连接，然后测序，OK
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6楼2014-12-08 18:11:24
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fanfenggui

金虫 (正式写手)
实验做完了吗？能告知，紧挨着的两个内切酶怎么切的吗？谢谢~
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爱由心起！
7楼2020-06-19 11:45:08
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