24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1769  |  回复: 7

lxyzsx

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒双酶切 已有6人参与

本人最近构建真核表达载体,提取重组质粒pcr有目的条带,而双酶切没有目的条带。为了检验酶活,分别单酶切,全都切开。各位大神,遇到这种情况是不是pcr出现假阳性了?我决定拿出去测序,如果测序结果正确,那怎么会出现双酶切切不出目的条带呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:54 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-16 21:28:22
可能出现污染了,测序结果对的话肯定能切开。
hehe
2楼2014-01-16 20:23:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月季花yrg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-16 21:28:32
测序正确的话肯定不是假阳性了,可能是一些特殊结构保护了酶切位点,就是切不开,可以直接用,但保险起见,建议重新换酶切位点冲构载体
3楼2014-01-16 21:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-18 11:49:44
可能双酶切效率非常低,建议更换buffer,或分步酶切
做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2014-01-16 21:42:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-18 11:49:47
很有可能,您的两个酶切位点离得太近,保护碱基不足,会出现这种情况的。离得太近,会有位阻影响,需要进行两次单酶切。
5楼2014-02-17 21:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-02-18 11:49:51
哎。。。何必纠结,一看就知道是菌落PCR假阳性。多做几个,挑取一下就好了。双酶切考虑buffer都好多年前的事情了,现在都有通用buffer的,你用thermo的酶再做做试试。位阻的考虑也是过多了,实际上虽然两个离得很近,但是由于另外一边的序列实在太长了,最后的结果就造成质粒异常的好切。不用考虑过近的问题。
6楼2014-02-17 22:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

双酶切是公用buffer吗?可能就出在共同切上了?还有一种可能是你这个酶切位点有问题,切开是的其他部位的,所以不见目的条带。
7楼2014-02-18 14:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

两个酶的温度,Buffer,质粒的浓度都要注意。
8楼2014-02-18 16:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxyzsx 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 352 求调剂 +4 yzion 2026-04-11 4/200 2026-04-11 08:38 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +31 yang婷 2026-04-10 31/1550 2026-04-11 00:19 by gong120082
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 085410-273求调剂 +4 X1999 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:29 by hemengdong
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 化工调剂求导师收留!一志愿失利,踏实肯干,有植物提取科研经历 +17 yzyzx 2026-04-09 17/850 2026-04-10 10:29 by wp06
[考研] 材料与化工371求调剂 +17 陪琳看海 2026-04-04 18/900 2026-04-10 07:51 by 314126402
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +15 多多爱吃汉堡 2026-04-04 16/800 2026-04-08 11:39 by i_cooler
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 生物工程求调剂 +13 喜欢还是不甘心 2026-04-05 13/650 2026-04-07 16:55 by Ecowxq666!
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
信息提示
请填处理意见