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lxyzsx

新虫 (初入文坛)

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[求助] 重组质粒双酶切已有6人参与

本人最近构建真核表达载体，提取重组质粒pcr有目的条带，而双酶切没有目的条带。为了检验酶活，分别单酶切，全都切开。各位大神，遇到这种情况是不是pcr出现假阳性了？我决定拿出去测序，如果测序结果正确，那怎么会出现双酶切切不出目的条带呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:54 ]

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1楼2014-01-16 19:33:30

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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-02-18 11:49:51

哎。。。何必纠结，一看就知道是菌落PCR假阳性。多做几个，挑取一下就好了。双酶切考虑buffer都好多年前的事情了，现在都有通用buffer的，你用thermo的酶再做做试试。位阻的考虑也是过多了，实际上虽然两个离得很近，但是由于另外一边的序列实在太长了，最后的结果就造成质粒异常的好切。不用考虑过近的问题。