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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 明明只有一个的酶切位点，为什么切完总是两条带？
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抹脖丧

新虫 (初入文坛)

[求助] 明明只有一个的酶切位点，为什么切完总是两条带？

构建好的质粒，明明只有一个的酶切位点，为什么切完总是两条带？可能是什么原因呢？百思不得其解，请求各位高人解答。谢谢！
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1楼2013-04-10 16:22:52
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的是什么酶？你参考的序列准确吗？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-10 17:34:39
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genolab

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会你连接进去的目的DNA里面含有酶切位点？
仔细检查一下。
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3楼2013-04-10 17:55:13
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抹脖丧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-10 17:34:39
你用的是什么酶？你参考的序列准确吗？

我用的是AlwNI,载体上只有一个点，连入的片段上没有，本来打算将载体线性化的，可切出来总是两条带
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4楼2013-04-11 09:10:02
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体图谱发过来看看 你连的序列也发过来 380270985  要么你的载体不正确，要么链接序列里有你用的没切位点，把控载体单酶切一下看看是不是一条带   如果链接片段长的话 单酶切一下目的片段 都正确的话 不可能出现上面问题
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5楼2013-04-11 09:25:46
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-11 11:52:34
环状质粒跟线性质粒电泳的速度是不一样的   可能是酶切不充分     可以切不同时间看看两个条带是不是都一样亮
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hold住
6楼2013-04-11 09:27:33
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