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笨笨和傻猪银虫 (小有名气)
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为什么电转后筛菌，然后用通用引物PCR，但是空GS115都PCR不出条带？跪求！回复！！ 已有5人参与
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我是电转整合型载体PpiczaA到毕赤酵母GS115中的，但是电转化完成后，进行筛菌。然后想通过菌落PCR先筛选一部分，以下是我的PCR方法及条件： 1）我采用的用未做电转的空菌GS115做对照，挑取平板上的菌用宝生物的lysis buffer（code ：9760）裂解的，然后取1ul进行的PCR,用的是宝生物的Taq酶，50ul体系 2)体系为：taq（5u/ml）： 0.25ul PCR条件：94℃ 10min 10×PCR buffer： 5ul 94℃ 30s dNTPs（各2.5mM）：4ul 54℃ 30s 模板为： 1ul 72℃ 3min40s 3AOX（10uM）： 1ul 72℃ 7min 5AOX(10UM）： 1ul 30个循环 灭菌水： 47.5ul 跪求各位原因啊，哎，什么条带也不出，我尝试了好几次裂解方式，仍旧如此 |
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