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tinychan

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR引物问题 已有8人参与

请问各位大牛,在菌液PCR中,我的空质粒和重组质粒用同一对引物P出了差不多大小的片段,这样正常吗?这对引物可以作为重组质粒验证的引物吗?(PS.电泳图前六个为重组质粒,后面四个为空质粒。

菌液PCR引物问题
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-25 12:26:11
你的引物是是什么的,如果是你的目的基因引物那么空质粒不应该有条带,可能有污染
2楼2014-09-25 01:10:31
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-25 12:26:20
做验证引物没问题。空质粒P出来带说明有气溶胶污染,建议换水、换mix,移液器 操作台用次氯酸消毒擦拭后再做验证测试。
3楼2014-09-25 11:47:41
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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tinychan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-25 12:26:33
看不到图。
如果不能区分片段大小就不能用于鉴定。
4楼2014-09-25 12:25:37
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:04
首先得看你的插入片段长度是多少,如果插入片段很短,当然空载和重组中扩增出片段差别就不大。
从图上看,两者没有区别。但是MARKER跑的也不是特别开,因此,我建议您用高浓度胶相对低一点电压多跑一会,看是否两者有差异。其次,你得鉴定一下重组质粒是否真正链接成功,用空载和重组质粒跑一个电泳,看二者是否有长度上的差异。然后再做菌落PCR
5楼2014-09-25 14:07:50
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fanwq258

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:09
污染了 ,找到污染源,解决问题
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
6楼2014-09-25 15:16:18
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好兵德克

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-26 16:45:28
如果片段不是特别小,那应该是空质粒,楼上说污染也是可能的
7楼2014-09-26 09:09:06
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A汪建华

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-26 16:45:35
污染的可能性比较大,或者连接不成功
心中有梦,地平线就不会太远!
8楼2014-09-26 16:41:31
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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污染了,找到是什么东西污染了
我不会!
9楼2014-09-26 16:48:18
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A汪建华

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

跟导师搞好关系很重要,忍忍
心中有梦,地平线就不会太远!
10楼2014-09-26 16:48:37
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