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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR引物问题
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tinychan

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR引物问题 已有8人参与

请问各位大牛，在菌液PCR中，我的空质粒和重组质粒用同一对引物P出了差不多大小的片段，这样正常吗？这对引物可以作为重组质粒验证的引物吗？（PS.电泳图前六个为重组质粒，后面四个为空质粒。

菌液PCR引物问题
20140924_201051.jpg
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1楼 2014-09-24 20:20:00
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
tinychan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-25 12:26:33
看不到图。
如果不能区分片段大小就不能用于鉴定。
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4楼2014-09-25 12:25:37
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-25 12:26:11
你的引物是是什么的，如果是你的目的基因引物那么空质粒不应该有条带，可能有污染
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2楼2014-09-25 01:10:31
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-25 12:26:20
做验证引物没问题。空质粒P出来带说明有气溶胶污染，建议换水、换mix，移液器 操作台用次氯酸消毒擦拭后再做验证测试。
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3楼2014-09-25 11:47:41
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:04
首先得看你的插入片段长度是多少，如果插入片段很短，当然空载和重组中扩增出片段差别就不大。
从图上看，两者没有区别。但是MARKER跑的也不是特别开，因此，我建议您用高浓度胶相对低一点电压多跑一会，看是否两者有差异。其次，你得鉴定一下重组质粒是否真正链接成功，用空载和重组质粒跑一个电泳，看二者是否有长度上的差异。然后再做菌落PCR
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5楼2014-09-25 14:07:50
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