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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR使用的通用引物序列是什么？
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR使用的通用引物序列是什么？

我的PCR产物要做克隆，扩的是18S/28S/ITS，关于引物有几个问题：
1、菌落PCR是不是可以使用原始PCR相同的引物？
2、菌落PCR使用的通用引物以及序列是什么？（在网上查到有M13F/R和M13F(-47)、M13R(-48)，不知道有什么区别）
3、所选的通用引物与使用的连接载体有关系吗？
4、克隆之后，拿菌液测序使用的引物又是什么呢？
新手上路，求高手指点！
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越努力越幸运
1楼 2013-12-08 11:21:07
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-12-09 09:15:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:07:50
1.用原始PCR引物就行。
2。3。4。 与载体有关，你网上查到的一般用于测序用，因为它们在存在于载体上，一般PMD19等克隆载体上都有M13F/R和M13F(-47)、M13R(-48)这样的引物，看看说明书
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星陈代谢
2楼2013-12-08 11:24:26
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孤城一片

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+4, ★有帮助 2013-12-09 09:15:42
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:07:59
你查的应该是测序载体PMD18T的引物，不过连上载体之后，不必非得用通用引物，用自己扩增目的片段的引物检测即可，而且也很方便
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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
3楼2013-12-08 14:17:24
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 孤城一片 at 2013-12-08 14:17:24
你查的应该是测序载体PMD18T的引物，不过连上载体之后，不必非得用通用引物，用自己扩增目的片段的引物检测即可，而且也很方便

您好！我今天做了一下菌落PCR，用的是我自己的引物，并且是特异性的，扩出来的条带也是目的条带的位置，但是师姐说有可能是假阳性，把菌的基因扩出来了，最好还是用M13。在还没有送测序的这十几个小时好忐忑啊！您觉得会是假阳性吗？
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越努力越幸运
4楼2013-12-13 18:20:50
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孤城一片

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2013-12-13 18:20:50
您好！我今天做了一下菌落PCR，用的是我自己的引物，并且是特异性的，扩出来的条带也是目的条带的位置，但是师姐说有可能是假阳性，把菌的基因扩出来了，最好还是用M13。在还没有送测序的这十几个小时好忐忑啊！您 ...

当时作对照了吗？如果有对照没事，应该不是假阳性，不用担心太多
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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
5楼2013-12-21 10:22:12
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玲ling儿

新虫 (初入文坛)
您好！同样是新手，您能给我指点下吗？有同样的疑问，谢谢！感激。
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6楼2018-04-01 12:21:59
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cry_2013

木虫 (正式写手)
1、通用引物与载体有关，不同载体的通用引物可以网上查到；2、检测的时候可以用通用引物也可以用自己引物做PCR，这两对引物都可能出现假阳性，3、可以做跨片段检查，这样假阳性率较低，就是上游用自己引物，下游用通用引物；4、测序如果只是确定扩增序列是否正确，用哪个引物都行。如果要基因序列，建议用通用引物测，因为现在测序两端50-100bp不准确。以上为个人经验，仅供参考
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7楼2018-04-02 13:29:11
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cry_2013

木虫 (正式写手)
silicare: 屏蔽内容 2018-04-02 15:22:51
本帖内容被屏蔽
8楼2018-04-02 13:31:14
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cry_2013

木虫 (正式写手)
silicare: 屏蔽内容 2018-04-02 15:22:33
本帖内容被屏蔽
9楼2018-04-02 13:31:41
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cry_2013

木虫 (正式写手)
silicare: 屏蔽内容 2018-04-02 15:22:36
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10楼2018-04-02 13:32:18
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