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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR使用的通用引物序列是什么?

我的PCR产物要做克隆,扩的是18S/28S/ITS,关于引物有几个问题:
1、菌落PCR是不是可以使用原始PCR相同的引物?
2、菌落PCR使用的通用引物以及序列是什么?(在网上查到有M13F/R和M13F(-47)、M13R(-48),不知道有什么区别)
3、所选的通用引物与使用的连接载体有关系吗?
4、克隆之后,拿菌液测序使用的引物又是什么呢?
新手上路,求高手指点!
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越努力越幸运
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cry_2013

木虫 (正式写手)

silicare: 屏蔽内容 2018-04-02 15:22:51
本帖内容被屏蔽

8楼2018-04-02 13:31:14
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-12-09 09:15:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 20:07:50
1.用原始PCR引物就行。
2。3。4。 与载体有关,你网上查到的一般用于测序用,因为它们在存在于载体上,一般PMD19等克隆载体上都有M13F/R和M13F(-47)、M13R(-48)这样的引物,看看说明书
星陈代谢
2楼2013-12-08 11:24:26
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孤城一片

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+4, 有帮助 2013-12-09 09:15:42
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 20:07:59
你查的应该是测序载体PMD18T的引物,不过连上载体之后,不必非得用通用引物,用自己扩增目的片段的引物检测即可,而且也很方便
本意探花郎,奈何芷若香;寄意予青陆,共沐好蟾光。
3楼2013-12-08 14:17:24
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 孤城一片 at 2013-12-08 14:17:24
你查的应该是测序载体PMD18T的引物,不过连上载体之后,不必非得用通用引物,用自己扩增目的片段的引物检测即可,而且也很方便

您好!我今天做了一下菌落PCR,用的是我自己的引物,并且是特异性的,扩出来的条带也是目的条带的位置,但是师姐说有可能是假阳性,把菌的基因扩出来了,最好还是用M13。在还没有送测序的这十几个小时好忐忑啊!您觉得会是假阳性吗?
越努力越幸运
4楼2013-12-13 18:20:50
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