应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 4553  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

scutphoenix

木虫 (正式写手)

[求助] TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？

一般的TA克隆，挑选白斑，菌落PCR阳性，送测序，结果老是空载，这是为什么呢？？谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

宠物狗狗

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-10 22:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scutphoenix: 金币+5, ★有帮助, 之前有个师姐也这么说过，现在就想赶速度了 2012-08-14 20:54:30
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-15 15:27:49
如果是菌落PCR容易产生假阳性(你原来连接产物粘在菌落上),所以你要先挑菌落传一次,然后取菌液做PCR.这样不会有假阳性.
     如果是连接不上,考虑你的扩增酶是高保真酶,不能产生非特异的PolyA尾巴.
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-08-14 16:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR阳性，有对照吗，影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落，不妨提质粒验证一下再测序。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-10 23:29:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-10 23:29:50
PCR阳性，有对照吗，影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落，不妨提质粒验证一下再测序。

有对照，并且也不是所有的菌落都是阳性的。
因为做的是TA克隆，所以就没提质粒。
有同学也发生类似的现象，换家测序公司居然就解决了，但我想不通是为什么。
当然，我的可能也不是这种情况。
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-11 07:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
提高金币，等待大家的帮助：）
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-12 21:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-13 15:05:29
加入连接酶之后，质粒自连了而你的片段未连上去，这就是为什么要多挑单克隆进行菌落PCR的原因啊。楼主，可以在做连接时加大DNA量（浓度高一点的DNA好一点），连接时间长一点，稍微多加一点连接酶等方法来解决连不上的原因，此外是否你的连接片段太长无法连上，如果只是为了测序，可以酶切成几段后再连或者在你的序列中设计引物将序列分成几个CONTIG后分别连接。如果是做表达，可以更换载体。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-13 08:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2012-08-13 09:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
谢谢。
个人认为整个体系还是挺成熟的，片段的扩增（用的takara的LAtaq）、TA克隆（TAKARA的试剂盒）、转化（takara的感受态）。之前也做成功过，但总是会发生转化后菌落pcr很好，拿去测序是空载。一般这样我会重复，从头开始，幸运的时候头一次成功，不幸的时候要重复个两三次，也就有结果了。
但实在想不通
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-13 11:20:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

billtsu

木虫 (正式写手)

木木

【答案】应助回帖

以前做TA克隆时，送去测序的是菌液，让测序公司自己接菌，再测的。
赞一下 回复此楼
啊木
8楼2012-08-14 15:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不要浪费时间了，你查出来上面原因，你就毕业了，换掉所有的药品与酶，从新p，连接，注意要加A，再来一次吧。
不骗你的，血的教训呀
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-14 23:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scutphoenix 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0832食品科学与工程学硕282调剂 +6 鱼在水中游a 2026-04-02 9/450 2026-04-05 11:45 by flysky1234
[考研] 318求调剂 +9 ykyhsa 2026-04-05 9/450 2026-04-05 11:36 by aidndnjck
[考研] 调剂求助 +10 想换手机不想解� 2026-04-02 13/650 2026-04-05 09:41 by sam3303
[考研] 材料与化工363求推荐 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:11 by 陌秋26
[考研] 283求调剂 +10 A child 2026-04-04 10/500 2026-04-05 08:22 by qlm5820
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +24 吃的不少 2026-04-02 24/1200 2026-04-04 23:20 by 永字号
[考研] 数二 英语一，求调剂，本科学校福建农林大学 +3 五峰尖 2026-03-29 3/150 2026-04-04 23:10 by zhyzzh
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 085600材料与化工调剂 +26 kikiki7 2026-03-30 27/1350 2026-04-04 09:18 by qlm5820
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +6 yikeniu 2026-04-01 6/300 2026-04-02 14:19 by smileboy2006
[考研] 学硕化学工程与技术，一志愿中国海洋大学320+求调剂 +8 披星河 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:12 by oooqiao
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭