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scutphoenix

木虫 (正式写手)

[求助] TA克隆测序结果老是显示空载,这是为什么呢??

一般的TA克隆,挑选白斑,菌落PCR阳性,送测序,结果老是空载,这是为什么呢??谢谢
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

谢谢。
个人认为整个体系还是挺成熟的,片段的扩增(用的takara的LAtaq)、TA克隆(TAKARA的试剂盒)、转化(takara的感受态)。之前也做成功过,但总是会发生转化后菌落pcr很好,拿去测序是空载。一般这样我会重复,从头开始,幸运的时候头一次成功,不幸的时候要重复个两三次,也就有结果了。
但实在想不通
7楼2012-08-13 11:20:53
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查看全部 12 个回答

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR阳性,有对照吗,影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落,不妨提质粒验证一下再测序。
2楼2012-08-10 23:29:50
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-10 23:29:50
PCR阳性,有对照吗,影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落,不妨提质粒验证一下再测序。

有对照,并且也不是所有的菌落都是阳性的。
因为做的是TA克隆,所以就没提质粒。
有同学也发生类似的现象,换家测序公司居然就解决了,但我想不通是为什么。
当然,我的可能也不是这种情况。
3楼2012-08-11 07:17:56
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

提高金币,等待大家的帮助:)
4楼2012-08-12 21:25:42
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