应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 4554  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

scutphoenix

木虫 (正式写手)

[求助] TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？

一般的TA克隆，挑选白斑，菌落PCR阳性，送测序，结果老是空载，这是为什么呢？？谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

宠物狗狗

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-10 22:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scutphoenix: 金币+5, ★有帮助, 之前有个师姐也这么说过，现在就想赶速度了 2012-08-14 20:54:30
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-15 15:27:49
如果是菌落PCR容易产生假阳性(你原来连接产物粘在菌落上),所以你要先挑菌落传一次,然后取菌液做PCR.这样不会有假阳性.
     如果是连接不上,考虑你的扩增酶是高保真酶,不能产生非特异的PolyA尾巴.
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-08-14 16:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR阳性，有对照吗，影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落，不妨提质粒验证一下再测序。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-10 23:29:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-10 23:29:50
PCR阳性，有对照吗，影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落，不妨提质粒验证一下再测序。

有对照，并且也不是所有的菌落都是阳性的。
因为做的是TA克隆，所以就没提质粒。
有同学也发生类似的现象，换家测序公司居然就解决了，但我想不通是为什么。
当然，我的可能也不是这种情况。
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-11 07:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
提高金币，等待大家的帮助：）
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-12 21:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-13 15:05:29
加入连接酶之后，质粒自连了而你的片段未连上去，这就是为什么要多挑单克隆进行菌落PCR的原因啊。楼主，可以在做连接时加大DNA量（浓度高一点的DNA好一点），连接时间长一点，稍微多加一点连接酶等方法来解决连不上的原因，此外是否你的连接片段太长无法连上，如果只是为了测序，可以酶切成几段后再连或者在你的序列中设计引物将序列分成几个CONTIG后分别连接。如果是做表达，可以更换载体。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-13 08:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2012-08-13 09:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scutphoenix

木虫 (正式写手)
谢谢。
个人认为整个体系还是挺成熟的，片段的扩增（用的takara的LAtaq）、TA克隆（TAKARA的试剂盒）、转化（takara的感受态）。之前也做成功过，但总是会发生转化后菌落pcr很好，拿去测序是空载。一般这样我会重复，从头开始，幸运的时候头一次成功，不幸的时候要重复个两三次，也就有结果了。
但实在想不通
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-13 11:20:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

billtsu

木虫 (正式写手)

木木

【答案】应助回帖

以前做TA克隆时，送去测序的是菌液，让测序公司自己接菌，再测的。
赞一下 回复此楼
啊木
8楼2012-08-14 15:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不要浪费时间了，你查出来上面原因，你就毕业了，换掉所有的药品与酶，从新p，连接，注意要加A，再来一次吧。
不骗你的，血的教训呀
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-14 23:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scutphoenix 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +3 狠狠加油 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:14 by 朱成玉2017
[考研] 本科211，293分请求调剂 +8 莲菜就是藕吧 2026-04-03 9/450 2026-04-05 19:12 by 蓝云思雨
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 0703调剂 +11 拾玖壹 2026-04-04 12/600 2026-04-05 10:29 by 果冻大王
[考研] 0703求调剂383分 +8 W55j 2026-04-03 8/400 2026-04-04 20:09 by xhai2011
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 311求调剂 +20 zchqwer 2026-04-01 22/1100 2026-04-03 22:09 by lglzsd
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 303求调剂 +10 DLkz1314. 2026-03-30 10/500 2026-04-03 18:03 by Jimmyandyou
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 313求调剂 +3 ～微微凉～ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 326求调剂 +3 9ahye 2026-04-02 4/200 2026-04-03 08:43 by Jaylen.
[考研] 0856材料与化工调剂，339 +14 10213207 2026-03-31 14/700 2026-04-02 21:01 by 1104338198
[考研] 085602化工求调剂（331分） +9 111@127 2026-03-30 9/450 2026-04-02 20:00 by dick_runner
[考研] 能源动力 调剂 +3 不破不立0 2026-04-02 3/150 2026-04-02 12:46 by ffffjjjj
[考研] 食品学硕362求调剂 +3 xuanxianxian 2026-04-01 3/150 2026-04-01 21:05 by 啊李999
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭