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tinychan

新虫 (初入文坛)

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[求助] 菌液PCR引物问题已有8人参与

请问各位大牛，在菌液PCR中，我的空质粒和重组质粒用同一对引物P出了差不多大小的片段，这样正常吗？这对引物可以作为重组质粒验证的引物吗？（PS.电泳图前六个为重组质粒，后面四个为空质粒。

20140924_201051.jpg

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1楼 2014-09-24 20:20:00

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chenguestc

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:04

首先得看你的插入片段长度是多少，如果插入片段很短，当然空载和重组中扩增出片段差别就不大。
从图上看，两者没有区别。但是MARKER跑的也不是特别开，因此，我建议您用高浓度胶相对低一点电压多跑一会，看是否两者有差异。其次，你得鉴定一下重组质粒是否真正链接成功，用空载和重组质粒跑一个电泳，看二者是否有长度上的差异。然后再做菌落PCR

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