| 查看: 922 | 回复: 3 | |||
浅笑包包新虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR的引物问题
|
|
为什么有的PCR体系需要三个引物，不是只需要上游引物和下游引物尽可以了吗？ 例如一篇文献中提到： 蛔虫抗菌肽基因的设计与合成: 根据目的基因序列及原核表达载体pMD-18T 和pET 30a ( + ) 的图谱, 利用软件Pr imer5. 0 辅助设计引物加入酶切位点。 F1 : 5c-CGGAAT T CAT GTCCTGGCT GTCTAAAACT GCT AAGAAAC-3c( 划线处为EcoR Ⅰ 酶标位点) ; F2 : 5c-AAACT GCTA AGAAA CT GGAAAACTCTGCT AAGAAA CGT ATCT CT GAAGGT ATCGCTAT C-3c; F3 : 5c-GT CAAGCT TT CATTAACGCGGACCGCCCTGGATAGCGATAGCGAT ACCTT C-3c( 划线处为Hind Ⅲ酶切位点) 。 请问引物F1、F2与F3分别是指什么引物？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有248人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中
已经有16人回复
- 关于pcr引物设计的问题
已经有6人回复
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- ISSR-PCR的引物问题是只用1条？
已经有9人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- PCR引物的量如何确定，求助高手指教
已经有11人回复
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
- PCR引物设计的问题
已经有8人回复
- pcr产物测序问题
已经有10人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】多重PCR引物设计
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！
已经有8人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR引物跨内含子的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
skywards
木虫 (著名写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1864.3
- 红花: 6
- 帖子: 1089
- 在线: 68.2小时
- 虫号: 2340487
- 注册: 2013-03-12
- 专业: 生物化学
2楼2013-03-25 16:15:01
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
浅笑包包: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-25 18:58:39
gyesang: 金币+2, 犀利！还有一个原因，有没有可能是一条长引物分成的两片段合成的，毕竟长片段合成比较贵？ 2013-04-27 13:57:31
感谢参与，应助指数 +1
浅笑包包: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-25 18:58:39
gyesang: 金币+2, 犀利！还有一个原因，有没有可能是一条长引物分成的两片段合成的，毕竟长片段合成比较贵？ 2013-04-27 13:57:31
|
你看F1和F2引物有重叠：F1的3端和F2引物的5端的15个碱基是重叠的。他们共同作为上游引物。 F3作为下游引物。 这样做的好处是增加了反应的特异性，提高了扩增的成功率。 如果只有一个上游引物，然后加上酶切位点的话，可能扩增不出目标片段来。F2是为了提高特异性，在此基础上利用F1加上酶切位点EcoR I。 使用三条引物，也是变相的巢式PCR。 |
3楼2013-03-25 16:41:17
mangmanglulu
金虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 669.5
- 散金: 5
- 帖子: 142
- 在线: 32.5小时
- 虫号: 1865926
- 注册: 2012-06-21
- 性别: GG
- 专业: 草地科学
4楼2013-03-26 09:28:25
