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浅笑包包新虫 (小有名气)
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PCR的引物问题
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为什么有的PCR体系需要三个引物，不是只需要上游引物和下游引物尽可以了吗？ 例如一篇文献中提到： 蛔虫抗菌肽基因的设计与合成: 根据目的基因序列及原核表达载体pMD-18T 和pET 30a ( + ) 的图谱, 利用软件Pr imer5. 0 辅助设计引物加入酶切位点。 F1 : 5c-CGGAAT T CAT GTCCTGGCT GTCTAAAACT GCT AAGAAAC-3c( 划线处为EcoR Ⅰ 酶标位点) ; F2 : 5c-AAACT GCTA AGAAA CT GGAAAACTCTGCT AAGAAA CGT ATCT CT GAAGGT ATCGCTAT C-3c; F3 : 5c-GT CAAGCT TT CATTAACGCGGACCGCCCTGGATAGCGATAGCGAT ACCTT C-3c( 划线处为Hind Ⅲ酶切位点) 。 请问引物F1、F2与F3分别是指什么引物？ |
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 分子生化实验经验积累 |
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gyesang: 金币+2, 犀利！还有一个原因，有没有可能是一条长引物分成的两片段合成的，毕竟长片段合成比较贵？ 2013-04-27 13:57:31
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你看F1和F2引物有重叠：F1的3端和F2引物的5端的15个碱基是重叠的。他们共同作为上游引物。 F3作为下游引物。 这样做的好处是增加了反应的特异性，提高了扩增的成功率。 如果只有一个上游引物，然后加上酶切位点的话，可能扩增不出目标片段来。F2是为了提高特异性，在此基础上利用F1加上酶切位点EcoR I。 使用三条引物，也是变相的巢式PCR。 |
3楼2013-03-25 16:41:17
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