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jingdejun铁杆木虫 (小有名气)
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引物设计的问题
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先说明一下，我是在前人的基础上做的实验，但是这个基础有点不扎实（因为她不是很懂分子方面的东西，为了毕业论文才硬着头皮做的）。 她利用真菌的通用引物从出发菌株（自己筛选的，后来鉴定出来是产黄青霉菌）中克隆出了一个核酸片段（号称是脂肪酶，因为原始菌株有脂肪酶活性），并且已测序。我就是在这个序列的基础上开展我的工作。我要做的是克隆和真核表达这个基因。 首先要设计引物。而第一步就是要找出保守序列。我通过ncbi的blast，发现此序列中只有一个保守区段（在上游），所以上游引物可以根据这个保守区段设计。 可是下游引物应该怎样办呢？ 再就是即便我克隆出了这个片段，我怎样确定它就是对应的脂肪酶的基因呢？ 本人第一次求助，希望可以得到帮助啊，谢谢。 |
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-07 12:20:10
西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-07 12:20:10
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这是两个不同的概念。 巢式PCR见http://baike.baidu.com/view/688277.htm。 TAIL-PCR见附件文献。 TAIL-PCR 中需要用到巢式PCR，但两者并不等同。 |
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