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2011jonathan

禁虫 (小有名气)

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11楼2012-04-27 09:40:55
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 2011jonathan at 2012-04-27 09:40:55:
楼主您好,想请教您“利用真菌的通用引物从出发菌株(自己筛选的,后来鉴定出来是产黄青霉菌)中克隆出了一个核酸片段),并且已测序”中的克隆出一个核酸片段是怎么克隆的啊,还有测序是怎么测的啊,还望明示

利用通用引物扩增得到的,只是这个菌的保守序列(对于我这个实验,是its序列),而这个序列因为它的保守性,可以用于做分子鉴定(因为这个菌是筛选出来的,需要进行形态学、生理生化、分子鉴定),而不是任何基因的序列。

假如这个菌确实可以表达某种酶的话,而你又想做这个基因的克隆,就必须设计相应的引物,选取合适的方法(这个一时半会说不清楚,就略过啦)。

关于测序,不是我们自己做的,一般都是送到一些基因测序公司。送的样品也分很多种,例如PCR产物、穿刺管、甘油管等等。

就这些,希望对你有点帮助。如果不明白,欢迎继续提问。
12楼2012-04-28 09:12:31
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王雨云

金虫 (小有名气)

你要克隆表达的真菌基因是已知基因还是未知基因先要查清楚,根据你菌株鉴定的结果去看看这个基因是否已经有人做过了。某些时候有人可能克隆了某个新基因,但没有做更多的研究,这个时候你就可以做这个基因的表达之类的工作。如果你确定自己克隆的是新基因,那就可能要用简并引物扩,做3,和5,race之类的,挺麻烦的,祝好运!
13楼2012-04-28 12:02:26
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

求助,我想克隆一个新基因,这个基因在NCBI里面的序列有预测字样,我该怎么做,谢谢解惑。
14楼2012-07-10 14:59:25
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