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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计的问题
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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11楼2012-04-27 09:40:55
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 2011jonathan at 2012-04-27 09:40:55:
楼主您好，想请教您“利用真菌的通用引物从出发菌株（自己筛选的，后来鉴定出来是产黄青霉菌）中克隆出了一个核酸片段），并且已测序”中的克隆出一个核酸片段是怎么克隆的啊，还有测序是怎么测的啊，还望明示

利用通用引物扩增得到的，只是这个菌的保守序列（对于我这个实验，是its序列），而这个序列因为它的保守性，可以用于做分子鉴定（因为这个菌是筛选出来的，需要进行形态学、生理生化、分子鉴定），而不是任何基因的序列。

假如这个菌确实可以表达某种酶的话，而你又想做这个基因的克隆，就必须设计相应的引物，选取合适的方法（这个一时半会说不清楚，就略过啦）。

关于测序，不是我们自己做的，一般都是送到一些基因测序公司。送的样品也分很多种，例如PCR产物、穿刺管、甘油管等等。

就这些，希望对你有点帮助。如果不明白，欢迎继续提问。
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12楼2012-04-28 09:12:31
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王雨云

金虫 (小有名气)
你要克隆表达的真菌基因是已知基因还是未知基因先要查清楚，根据你菌株鉴定的结果去看看这个基因是否已经有人做过了。某些时候有人可能克隆了某个新基因，但没有做更多的研究，这个时候你就可以做这个基因的表达之类的工作。如果你确定自己克隆的是新基因，那就可能要用简并引物扩，做3，和5，race之类的，挺麻烦的，祝好运！
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13楼2012-04-28 12:02:26
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
求助，我想克隆一个新基因，这个基因在NCBI里面的序列有预测字样，我该怎么做，谢谢解惑。
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14楼2012-07-10 14:59:25
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