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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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2011加油

银虫 (正式写手)


[交流] RT-PCR引物稀释问题,欢迎战友们进来指导!急盼中

大家好,我的引物是交给英骏公司合成,之前没进行过引物稀释,大家帮忙看看我将这样配制是否正确,我需要的引物终浓度为10umol/L。以其中一管引物为例:nmols per OD=4.4,每管为1OD,离心后,先加入10ul DEPC水稀释成100umol/L母液,混匀,再取出100ul母液加入900ulDEPC水,混匀,即得10umol/L溶液。

另外,稀释的溶液说法不一,有用灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水,是不是进行RT-PCR实验,采用DEPC水更好一些??

最后,英骏公司的DNA合成说明书背面,我有一些看不明白,给出这个信息
Scale of Synthesis:100nmole想说明的是什么哦??
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)


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2011加油: 金币+2, 是的,谢谢交流,是按照后面更正的来计算不?盼回复 2012-11-01 21:42:44
2011加油: 回帖置顶 2012-11-02 14:40:07
是开始加44ul depc水形成母液的吧
4楼2012-11-01 20:22:15
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普通回帖

2011加油

银虫 (正式写手)


有点错误了,需要更正一下,第一步先加44ul DEPC水,形成母液100umol/L。
2楼2012-11-01 19:50:25
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2011加油

银虫 (正式写手)


再去10ul母液加入90ul DEPC水,混匀,即得。
3楼2012-11-01 19:54:29
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gbone80

禁虫 (初入文坛)

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2011加油: 金币+2, 谢谢指导,能再回答一下说明书背面的100nmol是什么意思不?我确实没看明白 2012-11-01 21:43:47
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 13:56:07
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5楼2012-11-01 20:41:36
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as023

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
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2011加油: 金币+2, 谢谢交流啊 2012-11-02 08:18:32
用灭菌的二级水溶解即可
7楼2012-11-01 21:52:00
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
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2011加油: 金币+2, 呵呵,谢谢,那我明白了,每管有多少nmol,就先加入它10倍量的DEPC水变成母液。 2012-11-02 08:20:16
引用回帖:
4楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-01 20:22:15
是开始加44ul depc水形成母液的吧

是啊,我也是刚和师兄学习的嘿嘿
8楼2012-11-01 22:18:10
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flyde1234

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:56:21
2011加油: 金币+2, 恩,好的,谢谢指导。祝实验顺利 2012-11-02 14:41:36
楼主,稀释用水用二级水灭菌就可以了,如果没有用纯净水灭菌也可以,我们实验室是做过实验的发现它们之间对实验结果没什么影响。稀释的话你直接稀释成10uM就可以了,不用那么麻烦。
9楼2012-11-02 10:48:13
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小丑鱼663

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
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2011加油: 金币+2, 哈哈,我明白 2012-11-02 14:42:21
我也是他们 家的,都跑出来了.你稀释的根我不一样.我分两次稀释,第一次按管上的标志数*10倍稀释,之后在10倍稀释.
10楼2012-11-02 11:52:16
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小丑鱼663

金虫 (小有名气)


★ ★
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2011加油: 金币+1, 呵呵,是的,谢谢指出错误,我在下面的第二条和第三条发言中更正了。 2012-11-02 14:37:58
感觉你第一步就弄错了,呵呵,你做参考阿,提个建议.
11楼2012-11-02 11:54:49
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2011加油

银虫 (正式写手)


引用回帖:
11楼: Originally posted by 小丑鱼663 at 2012-11-02 11:54:49
感觉你第一步就弄错了,呵呵,你做参考阿,提个建议.

我在后面又更正了,你再帮我看看,对不?
13楼2012-11-02 14:36:50
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mutou1025

铜虫 (小有名气)


★ ★
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2011加油: 金币+1, 哈哈,引物终浓度是多少哦? 2012-11-02 17:37:26
做RT 引物浓度不能太高,要不溶解曲线上就会看到二聚体的曲线了。我做20ul 引物一般加0.6ul
14楼2012-11-02 15:14:24
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caoxin1984

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
稀释引物的溶液确实好多,灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可,对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示,引物在偏酸性的溶液中易降解(超纯水很多偏酸性),采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些
15楼2012-11-02 17:17:17
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2011加油

银虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by caoxin1984 at 2012-11-02 17:17:17
稀释引物的溶液确实好多,灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可,对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示,引物在偏酸性的溶液中易降解(超纯水很多偏酸性),采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些

恩 这个我也了解了一下
16楼2012-11-02 21:24:15
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永峰1230

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by gbone80 at 2012-11-01 20:41:36
PCR引物的储存浓度是100umol,按合成说明书上写明的加入DEPC水即得,然后取部分再稀释10倍,即10umol。在最终体系里面浓度是1umol。

请问,,如果OD是2.5     nmol 12.5
125 buffer for 100 mM
如何配制呢,,,与OD有关系吗
17楼2013-10-25 13:31:56
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简单回复
2012-11-01 21:43   回复  
bob198712楼
2012-11-02 12:00   回复  
2011加油: 金币+1, 谢谢顶贴 2012-11-02 14:38:07
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