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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中
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2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中

大家好，我的引物是交给英骏公司合成，之前没进行过引物稀释，大家帮忙看看我将这样配制是否正确，我需要的引物终浓度为10umol/L。以其中一管引物为例：nmols per OD=4.4，每管为1OD，离心后，先加入10ul DEPC水稀释成100umol/L母液，混匀，再取出100ul母液加入900ulDEPC水，混匀，即得10umol/L溶液。

另外，稀释的溶液说法不一，有用灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水，是不是进行RT-PCR实验，采用DEPC水更好一些？？

最后，英骏公司的DNA合成说明书背面，我有一些看不明白，给出这个信息
Scale of Synthesis:100nmole想说明的是什么哦？？
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1楼2012-11-01 19:48:36
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2011加油

银虫 (正式写手)
有点错误了，需要更正一下，第一步先加44ul DEPC水，形成母液100umol/L。
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2楼2012-11-01 19:50:25
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2011加油

银虫 (正式写手)
再去10ul母液加入90ul DEPC水，混匀，即得。
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3楼2012-11-01 19:54:29
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 小丑鱼663 at 2012-11-02 11:54:49
感觉你第一步就弄错了,呵呵,你做参考阿,提个建议.

我在后面又更正了，你再帮我看看，对不？
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13楼2012-11-02 14:36:50
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by caoxin1984 at 2012-11-02 17:17:17
稀释引物的溶液确实好多，灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可，对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示，引物在偏酸性的溶液中易降解（超纯水很多偏酸性），采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些

恩 这个我也了解了一下
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16楼2012-11-02 21:24:15
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2011加油6楼
2012-11-01 21:43   回复  
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