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RT-PCR引物稀释问题,欢迎战友们进来指导!急盼中
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[交流]
RT-PCR引物稀释问题,欢迎战友们进来指导!急盼中
大家好,我的引物是交给英骏公司合成,之前没进行过引物稀释,大家帮忙看看我将这样配制是否正确,我需要的引物终浓度为10umol/L。以其中一管引物为例:nmols per OD=4.4,每管为1OD,离心后,先加入10ul DEPC水稀释成100umol/L母液,混匀,再取出100ul母液加入900ulDEPC水,混匀,即得10umol/L溶液。
另外,稀释的溶液说法不一,有用灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水,是不是进行RT-PCR实验,采用DEPC水更好一些??
最后,英骏公司的DNA合成说明书背面,我有一些看不明白,给出这个信息
Scale of Synthesis:100nmole想说明的是什么哦??
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2012-11-01 19:48:36
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15楼
:
Originally posted by
caoxin1984
at 2012-11-02 17:17:17
稀释引物的溶液确实好多,灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可,对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示,引物在偏酸性的溶液中易降解(超纯水很多偏酸性),采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些
恩 这个我也了解了一下
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16楼
2012-11-02 21:24:15
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有点错误了,需要更正一下,第一步先加44ul DEPC水,形成母液100umol/L。
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2012-11-01 19:50:25
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再去10ul母液加入90ul DEPC水,混匀,即得。
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3楼
2012-11-01 19:54:29
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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 是的,谢谢交流,是按照后面更正的来计算不?盼回复
2012-11-01 21:42:44
2011加油: 回帖置顶
2012-11-02 14:40:07
是开始加44ul depc水形成母液的吧
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4楼
2012-11-01 20:22:15
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