应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中
171/1返回列表
查看: 2687  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中

大家好，我的引物是交给英骏公司合成，之前没进行过引物稀释，大家帮忙看看我将这样配制是否正确，我需要的引物终浓度为10umol/L。以其中一管引物为例：nmols per OD=4.4，每管为1OD，离心后，先加入10ul DEPC水稀释成100umol/L母液，混匀，再取出100ul母液加入900ulDEPC水，混匀，即得10umol/L溶液。

另外，稀释的溶液说法不一，有用灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水，是不是进行RT-PCR实验，采用DEPC水更好一些？？

最后，英骏公司的DNA合成说明书背面，我有一些看不明白，给出这个信息
Scale of Synthesis:100nmole想说明的是什么哦？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-11-01 19:48:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 是的，谢谢交流，是按照后面更正的来计算不？盼回复 2012-11-01 21:42:44
2011加油: 回帖置顶 2012-11-02 14:40:07
是开始加44ul depc水形成母液的吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-11-01 20:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
有点错误了，需要更正一下，第一步先加44ul DEPC水，形成母液100umol/L。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-01 19:50:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
再去10ul母液加入90ul DEPC水，混匀，即得。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-01 19:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gbone80

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 谢谢指导，能再回答一下说明书背面的100nmol是什么意思不？我确实没看明白 2012-11-01 21:43:47
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 13:56:07
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

永峰1230
5楼2012-11-01 20:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

as023

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 谢谢交流啊 2012-11-02 08:18:32
用灭菌的二级水溶解即可
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-01 21:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 呵呵，谢谢，那我明白了，每管有多少nmol，就先加入它10倍量的DEPC水变成母液。 2012-11-02 08:20:16
引用回帖:
4楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-01 20:22:15
是开始加44ul depc水形成母液的吧

是啊，我也是刚和师兄学习的嘿嘿
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-01 22:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyde1234

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:56:21
2011加油: 金币+2, 恩，好的，谢谢指导。祝实验顺利 2012-11-02 14:41:36
楼主，稀释用水用二级水灭菌就可以了，如果没有用纯净水灭菌也可以，我们实验室是做过实验的发现它们之间对实验结果没什么影响。稀释的话你直接稀释成10uM就可以了，不用那么麻烦。
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-02 10:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丑鱼663

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 哈哈，我明白 2012-11-02 14:42:21
我也是他们 家的,都跑出来了.你稀释的根我不一样.我分两次稀释,第一次按管上的标志数*10倍稀释,之后在10倍稀释.
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-02 11:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丑鱼663

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+1, 呵呵，是的，谢谢指出错误，我在下面的第二条和第三条发言中更正了。 2012-11-02 14:37:58
感觉你第一步就弄错了,呵呵,你做参考阿,提个建议.
赞一下 回复此楼
11楼2012-11-02 11:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 小丑鱼663 at 2012-11-02 11:54:49
感觉你第一步就弄错了,呵呵,你做参考阿,提个建议.

我在后面又更正了，你再帮我看看，对不？
赞一下 回复此楼
13楼2012-11-02 14:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mutou1025

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+1, 哈哈，引物终浓度是多少哦？ 2012-11-02 17:37:26
做RT 引物浓度不能太高，要不溶解曲线上就会看到二聚体的曲线了。我做20ul 引物一般加0.6ul
赞一下 回复此楼
14楼2012-11-02 15:14:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoxin1984

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
稀释引物的溶液确实好多，灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可，对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示，引物在偏酸性的溶液中易降解（超纯水很多偏酸性），采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些
赞一下 回复此楼
15楼2012-11-02 17:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by caoxin1984 at 2012-11-02 17:17:17
稀释引物的溶液确实好多，灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水均可，对后续进行RT-PCR实验影响不大。
但有报道显示，引物在偏酸性的溶液中易降解（超纯水很多偏酸性），采用偏碱性的TE溶液对于引物的长期保存会更好一些

恩 这个我也了解了一下
赞一下 回复此楼
16楼2012-11-02 21:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by gbone80 at 2012-11-01 20:41:36
PCR引物的储存浓度是100umol，按合成说明书上写明的加入DEPC水即得，然后取部分再稀释10倍，即10umol。在最终体系里面浓度是1umol。

请问，，如果OD是2.5     nmol 12.5
125 buffer for 100 mM
如何配制呢，，，与OD有关系吗
赞一下 回复此楼
17楼2013-10-25 13:31:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2011加油6楼
2012-11-01 21:43   回复  
bob198712楼
2012-11-02 12:00   回复  
2011加油: 金币+1, 谢谢顶贴 2012-11-02 14:38:07
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011加油 的主题更新
171/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297，工科调剂?河南农业大学本科 +15 河南农业大学-能 2026-04-14 15/750 2026-04-20 12:39 by Equinoxhua
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考研] 通信工程求调剂！！！ +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考博] 申博自荐 +4 Linxia林夏 2026-04-13 4/200 2026-04-19 19:55 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭