应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR弥散带问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1594  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR弥散带问题

请教各位一下啊，做RT-PCR时，条带从点样孔一直拖下来，可能的原因是什么啊？再就是能够扩出非目的基因条带，但就是扩不出目的基因的带，是不是说明cDNA是没问题的，问题在设计的引物上啊？急，谢谢啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-17 17:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-02-19 18:42:57
有内参，还扩不出来，个人认为最大的问题是引物设计不当
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-02-19 11:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一苇渡江.hr(金币+1): 2012-02-25 02:54:04
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
2楼2012-02-17 20:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

他们也说可能是这个原因，谢谢提醒啊，正准备做一个模板的梯度，明天看看能不能跑出结果来。
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-18 04:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励 2012-02-19 18:42:46
验证是不是模板问题，可以用内参试一下
内参可以，模板应该就没问题
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-18 09:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-18 09:14:10:
验证是不是模板问题，可以用内参试一下
内参可以，模板应该就没问题

就是之前有时候能跑出内参，也扩不出来基因啊，我要的是全长的，不好扩。好的，谢谢，我试试看。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-19 03:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanbofeiyue

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你解决了吗？我做RT-PCR的时候，也是好多条带，而且条带特别暗，退火温度优化过了，不解？
赞一下 回复此楼
justdoit!whateverotherssay!
7楼2012-02-20 20:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

跑了一个模板浓度梯度，短片段能扩出来，长的还是不行，不会是是mlv到不了5‘端，模板不完整吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-21 04:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-19 11:27:20:
有内参，还扩不出来，个人认为最大的问题是引物设计不当

刚刚能把目的基因的比较中间的片段扩出来，不知道是不是引物太靠近5’端了，反转录时用的oligo dt ，mlv到不了5’端。我的mRNA模板长2600左右。已经重新设计了几条引物，再试试。 3q
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-21 04:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by yanbofeiyue at 2012-02-20 20:07:45:
请问你解决了吗？我做RT-PCR的时候，也是好多条带，而且条带特别暗，退火温度优化过了，不解？

可能是引物的问题，是不是引物特异性不强，可以在线做个比对试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-02-21 04:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一苇渡江.hr 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料求调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:36 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +3 15933906766 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:17 by dongzh2009
[考研] 生物与医药调剂 +4 十七sa 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:05 by lys0704
[考研] 085600，321分求调剂 +10 大馋小子 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:25 by 544594351
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 315求调剂 +13 小羊小羊_ 2026-04-02 14/700 2026-04-04 20:30 by 蓝云思雨
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 化学调剂求助 +6 LULONG1 2026-04-03 6/300 2026-04-03 23:13 by qzxyhcsy
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +13 哇呼哼呼哼 2026-03-30 15/750 2026-04-03 15:24 by arrow8852
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 326求调剂 +10 崽崽仔 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:08 by 帕尔马拉特
[考研] 生物学327，求调剂 +5 书上的梅子 2026-04-01 6/300 2026-04-02 06:47 by ilovexiaobin
[考研] 310分求调剂 +4 成功上岸wang 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:35 by liu823948201
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭