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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR弥散带问题

请教各位一下啊,做RT-PCR时,条带从点样孔一直拖下来,可能的原因是什么啊?再就是能够扩出非目的基因条带,但就是扩不出目的基因的带,是不是说明cDNA是没问题的,问题在设计的引物上啊?急,谢谢啊!
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xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-02-19 18:42:57
有内参,还扩不出来,个人认为最大的问题是引物设计不当
6楼2012-02-19 11:27:20
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普通回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一苇渡江.hr(金币+1): 2012-02-25 02:54:04
楼主的模板稀释过吗?是不是模板浓度过大?
jiayoubashaonian
2楼2012-02-17 20:14:50
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗?是不是模板浓度过大?

他们也说可能是这个原因,谢谢提醒啊,正准备做一个模板的梯度,明天看看能不能跑出结果来。
3楼2012-02-18 04:03:18
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xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励 2012-02-19 18:42:46
验证是不是模板问题,可以用内参试一下
内参可以,模板应该就没问题
4楼2012-02-18 09:14:10
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-18 09:14:10:
验证是不是模板问题,可以用内参试一下
内参可以,模板应该就没问题

就是之前有时候能跑出内参,也扩不出来基因啊,我要的是全长的,不好扩。好的,谢谢,我试试看。。。
5楼2012-02-19 03:47:02
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yanbofeiyue

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问你解决了吗?我做RT-PCR的时候,也是好多条带,而且条带特别暗,退火温度优化过了,不解?
justdoit!whateverotherssay!
7楼2012-02-20 20:07:45
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗?是不是模板浓度过大?

跑了一个模板浓度梯度,短片段能扩出来,长的还是不行,不会是是mlv到不了5‘端,模板不完整吧
8楼2012-02-21 04:20:21
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-19 11:27:20:
有内参,还扩不出来,个人认为最大的问题是引物设计不当

刚刚能把目的基因的比较中间的片段扩出来,不知道是不是引物太靠近5’端了,反转录时用的oligo dt ,mlv到不了5’端。我的mRNA模板长2600左右。已经重新设计了几条引物,再试试。 3q
9楼2012-02-21 04:24:51
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一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by yanbofeiyue at 2012-02-20 20:07:45:
请问你解决了吗?我做RT-PCR的时候,也是好多条带,而且条带特别暗,退火温度优化过了,不解?

可能是引物的问题,是不是引物特异性不强,可以在线做个比对试试
10楼2012-02-21 04:27:57
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