应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR弥散带问题
121/2返回列表12下一页
查看: 1785  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR弥散带问题

请教各位一下啊，做RT-PCR时，条带从点样孔一直拖下来，可能的原因是什么啊？再就是能够扩出非目的基因条带，但就是扩不出目的基因的带，是不是说明cDNA是没问题的，问题在设计的引物上啊？急，谢谢啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-17 17:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-02-19 18:42:57
有内参，还扩不出来，个人认为最大的问题是引物设计不当
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-02-19 11:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一苇渡江.hr(金币+1): 2012-02-25 02:54:04
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
2楼2012-02-17 20:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

他们也说可能是这个原因，谢谢提醒啊，正准备做一个模板的梯度，明天看看能不能跑出结果来。
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-18 04:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoke2046

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励 2012-02-19 18:42:46
验证是不是模板问题，可以用内参试一下
内参可以，模板应该就没问题
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-18 09:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-18 09:14:10:
验证是不是模板问题，可以用内参试一下
内参可以，模板应该就没问题

就是之前有时候能跑出内参，也扩不出来基因啊，我要的是全长的，不好扩。好的，谢谢，我试试看。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-19 03:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanbofeiyue

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你解决了吗？我做RT-PCR的时候，也是好多条带，而且条带特别暗，退火温度优化过了，不解？
赞一下 回复此楼
justdoit!whateverotherssay!
7楼2012-02-20 20:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

跑了一个模板浓度梯度，短片段能扩出来，长的还是不行，不会是是mlv到不了5‘端，模板不完整吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-21 04:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-19 11:27:20:
有内参，还扩不出来，个人认为最大的问题是引物设计不当

刚刚能把目的基因的比较中间的片段扩出来，不知道是不是引物太靠近5’端了，反转录时用的oligo dt ，mlv到不了5’端。我的mRNA模板长2600左右。已经重新设计了几条引物，再试试。 3q
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-21 04:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一苇渡江.hr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by yanbofeiyue at 2012-02-20 20:07:45:
请问你解决了吗？我做RT-PCR的时候，也是好多条带，而且条带特别暗，退火温度优化过了，不解？

可能是引物的问题，是不是引物特异性不强，可以在线做个比对试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-02-21 04:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一苇渡江.hr 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 16/800 2026-08-11 08:18 by wmfsnow
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭