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karuirui

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR阴性对照出条带，但是内参没有，换了一管新的引物还是有条带已有4人参与

请教各位大神，PCR阴性对照（没有cDNA，只有引物、水、taq酶）出条带，而且大小正好是我的目的基因大小，循环32圈，但是内参的阴性没有条带，这是为什么呢！以为是引物被污染了，但是换了一管新的，还是有目的条带！
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1楼2014-06-08 16:52:06
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
karuirui(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-08 20:50:15
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况，阴性出来肯定不正常，除非你的片段刚好100bp左右，跟引物二聚体大小差不多，这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边，如果还出来，极有可能是二聚体
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天行健
2楼2014-06-08 17:26:04
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karuirui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-08 17:26:04
水或试剂被污染了
或者是你记错了

一般这种情况，阴性出来肯定不正常，除非你的片段刚好100bp左右，跟引物二聚体大小差不多，这种情况也存在。

建议把所有试剂换了重新做一边，如果还出来，极有可能是二聚体

我所的东西都换了，包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。
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3楼2014-06-09 10:52:29
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by karuirui at 2014-06-09 10:52:29
我所的东西都换了，包括水……还是有。目的条带的大小是二百多。...

神了个奇，难道你的引物被污染了？这个很少见啊，你试一下，换组其他引物来扩增你的cDNA,如果依然可以扩增出来200bp，额，见鬼了
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天行健
4楼2014-06-09 11:41:26
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xcchh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是出现假阳，引物不行？
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5楼2014-06-09 15:46:53
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karuirui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-09 11:41:26
神了个奇，难道你的引物被污染了？这个很少见啊，你试一下，换组其他引物来扩增你的cDNA,如果依然可以扩增出来200bp，额，见鬼了...

恩，已经重新合成引物了
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6楼2014-06-09 17:53:51
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karuirui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xcchh at 2014-06-09 15:46:53
是不是出现假阳，引物不行？

重复多次了，一直有，不知道怎么回事
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7楼2014-06-09 17:54:28
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xcchh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by karuirui at 2014-06-09 17:54:28
重复多次了，一直有，不知道怎么回事...

那应该是你的引物质量不是很好
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8楼2014-06-19 11:21:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

纯水仪可能长藻类，水里有藻类DNA，如果运气不好，你的引物刚好可以扩增
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9楼2014-06-19 16:52:16
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kekebing

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by karuirui at 2014-06-09 17:54:28
重复多次了，一直有，不知道怎么回事...

请问你污染的问题解决了吗？我现在也遇到了类似的问题
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随其自然
10楼2014-06-26 15:59:45
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