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汕头大学海洋科学接受调剂
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 最近RT-PCR能够出来内参,却没有目的条带,请各位高手帮忙

各位好,我最近做RT-PCR,在一个月前做的时候我还能将目的基因和内参都扩增出来,但是现在又新提取RNA,做RT-PCR,结果没有目的条带,内参可以看见,跑胶的时候,在目的基因泳道只是在能看到引物二聚体!!!我的引物是使用一个月之前的,一直没有换新的,我想问一下各位,出现这种原因是什么情况!!???谢谢大家!
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
原因可能是你现在稀释的引物有问题了,我也遇见过这样的问题,建议你重新稀释引物试一试
2楼2012-09-14 15:23:44
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-14 15:23:44
原因可能是你现在稀释的引物有问题了,我也遇见过这样的问题,建议你重新稀释引物试一试

还要问一下,稀释好的引物需不需要分装一下,这样子可以避免反复冻融,我想用DEPC处理过的离心管分装,这样子可以吧?
3楼2012-09-16 08:34:42
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-14 15:23:44
原因可能是你现在稀释的引物有问题了,我也遇见过这样的问题,建议你重新稀释引物试一试

一般引物设计不是有4对嘛,稀释的引物一般就是一管,4度保存,不存在反复冻存呀
4楼2012-09-18 09:46:14
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 09:46:14
一般引物设计不是有4对嘛,稀释的引物一般就是一管,4度保存,不存在反复冻存呀...

呀,我们都是用完一次直接放在了-20里面了,呵呵
5楼2012-09-18 13:02:02
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 09:46:14
一般引物设计不是有4对嘛,稀释的引物一般就是一管,4度保存,不存在反复冻存呀...

呵呵,每个实验室都有自己的方法嘛,反正我们是放在4度冰箱的,这样做也没问题。
6楼2012-09-18 15:16:50
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 15:16:50
呵呵,每个实验室都有自己的方法嘛,反正我们是放在4度冰箱的,这样做也没问题。...

呵呵 对的  ,我想问一下你们做核酸电泳的时候常用的是什么核酸染料,是EB,Goldenview,还是别的??谢谢!
7楼2012-09-18 20:40:28
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yq19880610

新虫 (初入文坛)

我也遇到同样的问题那 明天重新换对引物试试 关注中~
8楼2013-04-15 19:02:48
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yq19880610 at 2013-04-15 19:02:48
我也遇到同样的问题那 明天重新换对引物试试 关注中~

后来检测引物没有问题,注意RNA提取和RT这一步就很重要了
9楼2013-04-17 08:01:45
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xiaoyangren7

金虫 (小有名气)

引物10pm放在-20可以用很久
10楼2013-04-17 09:23:23
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