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czcpudai

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[求助] 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙

各位好，我最近做RT-PCR，在一个月前做的时候我还能将目的基因和内参都扩增出来，但是现在又新提取RNA，做RT-PCR，结果没有目的条带，内参可以看见，跑胶的时候，在目的基因泳道只是在能看到引物二聚体！！！我的引物是使用一个月之前的，一直没有换新的，我想问一下各位，出现这种原因是什么情况！！？？？谢谢大家！

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1楼 2012-09-14 15:05:25

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

原因可能是你现在稀释的引物有问题了，我也遇见过这样的问题，建议你重新稀释引物试一试

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2楼2012-09-14 15:23:44

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czcpudai

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2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-14 15:23:44
原因可能是你现在稀释的引物有问题了，我也遇见过这样的问题，建议你重新稀释引物试一试

还要问一下，稀释好的引物需不需要分装一下，这样子可以避免反复冻融，我想用DEPC处理过的离心管分装，这样子可以吧？

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3楼2012-09-16 08:34:42

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【答案】应助回帖

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2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-14 15:23:44
原因可能是你现在稀释的引物有问题了，我也遇见过这样的问题，建议你重新稀释引物试一试

一般引物设计不是有4对嘛，稀释的引物一般就是一管，4度保存，不存在反复冻存呀

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4楼2012-09-18 09:46:14

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czcpudai

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4楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 09:46:14
一般引物设计不是有4对嘛，稀释的引物一般就是一管，4度保存，不存在反复冻存呀...

呀，我们都是用完一次直接放在了-20里面了，呵呵

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5楼2012-09-18 13:02:02

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【答案】应助回帖

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4楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 09:46:14
一般引物设计不是有4对嘛，稀释的引物一般就是一管，4度保存，不存在反复冻存呀...

呵呵，每个实验室都有自己的方法嘛，反正我们是放在4度冰箱的，这样做也没问题。

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6楼2012-09-18 15:16:50

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czcpudai

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6楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-18 15:16:50
呵呵，每个实验室都有自己的方法嘛，反正我们是放在4度冰箱的，这样做也没问题。...

呵呵对的，我想问一下你们做核酸电泳的时候常用的是什么核酸染料，是EB，Goldenview，还是别的？？谢谢！

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7楼2012-09-18 20:40:28

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yq19880610

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我也遇到同样的问题那明天重新换对引物试试关注中~

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8楼2013-04-15 19:02:48

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8楼: Originally posted by yq19880610 at 2013-04-15 19:02:48
我也遇到同样的问题那明天重新换对引物试试关注中~

后来检测引物没有问题，注意RNA提取和RT这一步就很重要了

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9楼2013-04-17 08:01:45

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xiaoyangren7

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引物10pm放在-20可以用很久

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10楼2013-04-17 09:23:23

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