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带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 引物浓度不一致会导致PCR无扩增带么？ 已有3人参与

如图，DL1000 Marker,1为F引物，2为R引物，3和4为分别用pfu和tac酶扩增结果，目的带约350bp，可是除了引物带什么也没有啊，求大神指导！！

引物浓度不一致会导致PCR无扩增带么？
20140427Ptrc改条件后PCR（1）.jpg
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怎知一死生为虚诞？
1楼 2014-04-29 10:28:34
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板加了多少？你确定PCR的条件没问题？
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2楼2014-04-29 11:06:32
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
带走云彩(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-29 18:18:21
带走云彩: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-06 19:55:48
PCR条件如何，一般引物浓度高 二聚体会多些，应该不会木有目的条带吧，搞个内参看下是不是模板的问题
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只有不断地失败才会成功
3楼2014-04-29 11:08:57
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by r-rainbow at 2014-04-29 11:06:32
模板加了多少？你确定PCR的条件没问题？

20ul体系，上来加了2ul模板，感觉多了，后来加了0.2ul，都没有扩增带，PCR条件也反复试了好些，降低了退火温度，增加了延伸时间和循环数，我也试过稀释引物，可都没有条带啊。。。
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怎知一死生为虚诞？
4楼2014-04-29 11:32:17
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-29 11:08:57
PCR条件如何，一般引物浓度高 二聚体会多些，应该不会木有目的条带吧，搞个内参看下是不是模板的问题

内参的意思是？我想试下该模版上的通用引物，可惜没有。。。
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怎知一死生为虚诞？
5楼2014-04-29 11:33:56
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zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-04-29 11:33:56
内参的意思是？我想试下该模版上的通用引物，可惜没有。。。...

内参就是模板上都有的指示物，如 β-actin 等，可以大致知道你的模板怎么样
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只有不断地失败才会成功
6楼2014-04-29 11:40:57
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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带走云彩: 金币+2, ★有帮助 2014-05-06 19:56:09
建议引物浓度尽量保持一致，可以先用楼上的建议试试模板，再不行可以试着重新设计引物
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-04-29 18:17:59
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fly_锋

铁虫 (初入文坛)
您好！看了你的说明，你说1，2是F，R引物？？平时我们的认知是说F.R分别代表前端引物和后端引物！PCR扩增，是需要同时加入前后端引物的。另外你的3.4的变量是酶？？有加入引物吗？？
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8楼2014-11-10 15:19:46
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