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带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 引物浓度不一致会导致PCR无扩增带么? 已有3人参与

如图,DL1000 Marker,1为F引物,2为R引物,3和4为分别用pfu和tac酶扩增结果,目的带约350bp,可是除了引物带什么也没有啊,求大神指导!!

引物浓度不一致会导致PCR无扩增带么?
20140427Ptrc改条件后PCR(1).jpg
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怎知一死生为虚诞?
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板加了多少?你确定PCR的条件没问题?
2楼2014-04-29 11:06:32
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
带走云彩(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-29 18:18:21
带走云彩: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-06 19:55:48
PCR条件如何,一般引物浓度高 二聚体会多些,应该不会木有目的条带吧,搞个内参看下是不是模板的问题
只有不断地失败才会成功
3楼2014-04-29 11:08:57
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by r-rainbow at 2014-04-29 11:06:32
模板加了多少?你确定PCR的条件没问题?

20ul体系,上来加了2ul模板,感觉多了,后来加了0.2ul,都没有扩增带,PCR条件也反复试了好些,降低了退火温度,增加了延伸时间和循环数,我也试过稀释引物,可都没有条带啊。。。
怎知一死生为虚诞?
4楼2014-04-29 11:32:17
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-29 11:08:57
PCR条件如何,一般引物浓度高 二聚体会多些,应该不会木有目的条带吧,搞个内参看下是不是模板的问题

内参的意思是?我想试下该模版上的通用引物,可惜没有。。。
怎知一死生为虚诞?
5楼2014-04-29 11:33:56
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zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-04-29 11:33:56
内参的意思是?我想试下该模版上的通用引物,可惜没有。。。...

内参就是模板上都有的指示物,如 β-actin 等,可以大致知道你的模板怎么样
只有不断地失败才会成功
6楼2014-04-29 11:40:57
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
带走云彩: 金币+2, 有帮助 2014-05-06 19:56:09
建议引物浓度尽量保持一致,可以先用楼上的建议试试模板,再不行可以试着重新设计引物
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
7楼2014-04-29 18:17:59
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fly_锋

铁虫 (初入文坛)

您好!看了你的说明,你说1,2是F,R引物??平时我们的认知是说F.R分别代表前端引物和后端引物!PCR扩增,是需要同时加入前后端引物的。另外你的3.4的变量是酶??有加入引物吗??
8楼2014-11-10 15:19:46
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