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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问一下要是一对引物做普通PCR的目的条带都很淡
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leicandy

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-02-26 20:36:35
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-26 21:00:13
请把你的marker标上，把你的问题问清楚了，这样大家才能帮得上忙
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-26 20:49:56
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:09:59
PCR结果不清与你引物与模板结合相关，你引物最好先跑个梯度。再一个你多设计几对引物。
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hehe
3楼2014-02-26 21:38:47
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
条带不清的原因很多，首先要考虑你的引物特异性如何，还有你的程序‘试剂等等。
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学习使你立于不败之地
4楼2014-02-26 23:04:42
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leicandy

禁虫 (小有名气)
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5楼2014-02-27 08:57:21
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leicandy

禁虫 (小有名气)
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6楼2014-02-27 08:57:50
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leicandy

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2014-02-27 09:00:51
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by leicandy at 2014-02-27 08:57:21
不好意思，第一张图的marker是最后一个，第二张图的marker是第一个...

我指的是你marker的大小
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
8楼2014-02-27 09:15:24
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by leicandy at 2014-02-27 08:57:50
你们一般引物梯度是怎么设置的？...

45度到65度
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hehe
9楼2014-02-27 14:43:41
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by leicandy at 2014-02-27 09:00:51
引物特异性到是没问题，在NCBI上blast过，特异性好才拿去公司合成的。第一张图你看第5、6、7我都P出来了，就是从第2个到第4个和第8和第9没有出来，这应该证明试剂是没问题的，就是第一张图里面用的退火温度都是55度...

引物的特异性怎么在NCBI上blast？
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10楼2014-02-27 18:33:21
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