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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位高手！PCR中的阴性对照总是出现特异性条带
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zcsy

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位高手！PCR中的阴性对照总是出现特异性条带已有2人参与

最近做PCR的时候，设置的阴性对照总是出现和阳性一样大小的特异性条带。更换了水，MIX后依然存在。有时候比阳性还亮。而设置的空白对照（只加水和MIX）中就没有任何条带。于是又重新合了一管新引物（序列和上次的相同），用新处理的水稀释后又做了一次，还是有条带。将阴性对照送测序，结果发现是模板DNA 污染。求教各位高手，这到底是怎么污染的？我重合引物是用以前相同的序列，还是重新设计一个，再合成？小弟跪谢！！
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加油！
1楼2014-01-01 10:45:48
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-02 08:36:38
你的模板浓度太高了啦，
稀释再稀释。。。。。。
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2楼2014-01-01 17:03:13
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111111aa

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-02 08:36:44
扩增产物污染，需重新设计引物
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3楼2014-01-01 19:19:44
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zcsy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-01 17:03:13
你的模板浓度太高了啦，
稀释再稀释。。。。。。

再请教大侠，模板浓度高与隐性对照出现条带有什么关系？谢谢
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加油！
4楼2014-01-02 19:27:13
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zcsy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 111111aa at 2014-01-01 19:19:44
扩增产物污染，需重新设计引物

能否请教，有哪些可能性造成这种污染？谢谢！
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加油！
5楼2014-01-02 19:31:42
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