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一苇渡江.hr

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[求助] RT-PCR弥散带问题

请教各位一下啊，做RT-PCR时，条带从点样孔一直拖下来，可能的原因是什么啊？再就是能够扩出非目的基因条带，但就是扩不出目的基因的带，是不是说明cDNA是没问题的，问题在设计的引物上啊？急，谢谢啊！

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1楼 2012-02-17 17:50:51

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一苇渡江.hr

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楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2012-02-19 11:27:20:
有内参，还扩不出来，个人认为最大的问题是引物设计不当

刚刚能把目的基因的比较中间的片段扩出来，不知道是不是引物太靠近5’端了，反转录时用的oligo dt ，mlv到不了5’端。我的mRNA模板长2600左右。已经重新设计了几条引物，再试试。 3q

9楼2012-02-21 04:24:51

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blackrose8089

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【答案】应助回帖

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一苇渡江.hr(金币+1): 2012-02-25 02:54:04

楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

jiayoubashaonian

2楼2012-02-17 20:14:50

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一苇渡江.hr

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楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-17 20:14:50:
楼主的模板稀释过吗？是不是模板浓度过大？

他们也说可能是这个原因，谢谢提醒啊，正准备做一个模板的梯度，明天看看能不能跑出结果来。

3楼2012-02-18 04:03:18

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xiaoke2046

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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+1): 鼓励 2012-02-19 18:42:46

验证是不是模板问题，可以用内参试一下
内参可以，模板应该就没问题

4楼2012-02-18 09:14:10

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