应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘s race PCR问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/2返回列表12下一页
查看: 2097  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

摩都520

铜虫 (小有名气)

[求助] 3‘s race PCR问题

求助哪个伙伴帮分析，我的prog是
94C 3min
94   30s
55   30s
72   90s
72   3min
4     1min
然后开始是35循环，二次PCR是38循环，有很多杂带，有一条杂带1000多很亮，目的带没有（估计目的带为400）
然后听同学建议，二次PCR跑的55循环，还是很多杂带，仍一带带1000多很亮，

第三次实验，是一次PCR，45循环，仍杂带，目的带无，有一条1000多亮杂带。

求哪位大伙伴，小伙伴帮助！！！我是新虫，不懂还请指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
只做一件事，做绝
1楼 2013-08-04 00:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
摩都520(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 12:02:00
退火温度向高地提一下试试，没做巢式么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-04 01:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 12:02:07
如果模板为cDNA 预变性40 S足够了哈！当然这不重要，做race的时候获得多条带非常正常，一般取长者测序，不过我不明白的是，既然是race，你怎么知道目的带大小呢？
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
3楼2013-08-04 04:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-04 04:08:56
如果模板为cDNA 预变性40 S足够了哈！当然这不重要，做race的时候获得多条带非常正常，一般取长者测序，不过我不明白的是，既然是race，你怎么知道目的带大小呢？

嗯，我做的是鱼，这条鱼的基因组已经出来了，采用的是NCBI预测序列，1428bp，
PREDICTED: Oreochromis niloticus peroxisome proliferator-activated receptor alpha-like, transcript variant 2 (LOC100697805), mRNA
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
4楼2013-08-04 19:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2013-08-04 01:30:36
退火温度向高地提一下试试，没做巢式么？

嗯，没摸梯度，依经验另一个同学做的同一功能作用相反的基因，二次PCR做的就是巢式。他做5 RACE的提高了退火温度，做出的
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
5楼2013-08-04 20:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 摩都520 at 2013-08-04 19:56:57
嗯，我做的是鱼，这条鱼的基因组已经出来了，采用的是NCBI预测序列，1428bp，
PREDICTED: Oreochromis niloticus peroxisome proliferator-activated receptor alpha-like, transcript variant 2 (LOC100697805), ...

那直接设计对特异引物就好，没必要race啊！
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
6楼2013-08-04 23:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个显然退货温度低了阿
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-05 09:21:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-04 23:26:17
那直接设计对特异引物就好，没必要race啊！...

还是要的，只是基因组知道，但具体各个基因序列还不能推测，据说预测的只是通过基因软件得到很多基因序列，然后这些基因序列跟其它相近物种已知基因比，发现这个基因序列正好跟其它鱼的这个基因PPAR像，就预测认为这个序列也是PPAR基因。

但是软件得到的只是编码区序列，而可能3‘端还有很长非编码区基因还不知道。所以要跑RACE

不知以上我这个听来的解释对不对？

大谢回复！！！！
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
8楼2013-08-05 17:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by grape_vine at 2013-08-05 09:21:27
这个显然退货温度低了阿

嗯，我也怀疑过是退火温度。用的是天根的试剂盒，里面就是是55C（附图中显示）

我问过我同学，他说一般不摸退火温度（比较费模板cDNA）。


所以现在也只能怀疑是退火温度。


大谢回复哦～因为我刚学做，然后想摸退火温度，首先想更加确定分析出最可能原因，其次而这样比较费模板cDNA。

每次反转录得到10微升，模板三个引物，要4微升。跑两次outer就没了。

当然经过大家分析假如最可能是退火温度，是必然会摸温度的。
3‘s race PCR问题
IMG_20130805_170102.jpg
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
9楼2013-08-05 17:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2013-08-04 01:30:36
退火温度向高地提一下试试，没做巢式么？


左边三道是引物 1    2    3的产物（这是outer的，稍后上传inner的）
很多杂带         右边很亮的是内参基因
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
10楼2013-08-05 17:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 摩都520 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂 +17 艾志恒 2026-04-03 18/900 2026-04-06 07:10 by jj987
[考研] 308求调剂 +11 倘若起风了呢 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:21 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 环境285分，过六级，求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +6 晚风不晚 2026-04-04 6/300 2026-04-04 20:11 by dongzh2009
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 求调剂 +7 Aniyaio 2026-04-02 7/350 2026-04-02 16:42 by zzsw+
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 一志愿9初试366 本双非求调剂 +4 运气来得若有似� 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:56 by guanxin1001
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭