应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘s race PCR问题
51/1返回列表
查看: 2398  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)

[求助] 3‘s race PCR问题

求助哪个伙伴帮分析，我的prog是
94C 3min
94   30s
55   30s
72   90s
72   3min
4     1min
然后开始是35循环，二次PCR是38循环，有很多杂带，有一条杂带1000多很亮，目的带没有（估计目的带为400）
然后听同学建议，二次PCR跑的55循环，还是很多杂带，仍一带带1000多很亮，

第三次实验，是一次PCR，45循环，仍杂带，目的带无，有一条1000多亮杂带。

求哪位大伙伴，小伙伴帮助！！！我是新虫，不懂还请指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
只做一件事，做绝
1楼 2013-08-04 00:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 12:02:07
如果模板为cDNA 预变性40 S足够了哈！当然这不重要，做race的时候获得多条带非常正常，一般取长者测序，不过我不明白的是，既然是race，你怎么知道目的带大小呢？
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
3楼2013-08-04 04:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
摩都520(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 12:02:00
退火温度向高地提一下试试，没做巢式么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-04 01:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-04 04:08:56
如果模板为cDNA 预变性40 S足够了哈！当然这不重要，做race的时候获得多条带非常正常，一般取长者测序，不过我不明白的是，既然是race，你怎么知道目的带大小呢？

嗯，我做的是鱼，这条鱼的基因组已经出来了，采用的是NCBI预测序列，1428bp，
PREDICTED: Oreochromis niloticus peroxisome proliferator-activated receptor alpha-like, transcript variant 2 (LOC100697805), mRNA
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
4楼2013-08-04 19:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩都520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2013-08-04 01:30:36
退火温度向高地提一下试试，没做巢式么？

嗯，没摸梯度，依经验另一个同学做的同一功能作用相反的基因，二次PCR做的就是巢式。他做5 RACE的提高了退火温度，做出的
赞一下 回复此楼
只做一件事，做绝
5楼2013-08-04 20:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭