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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘RACE实验好不好做
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ranranxing

金虫 (小有名气)

[求助] 3‘RACE实验好不好做

分子生物学新手，实验方案里计划通过3’RACE实验验证基因是否表达以及查找表达的基因。看文献里面也是通过这种方法做的，但是今天去找导师，听说之前有位师姐做3‘RACE做了好几年到毕业也没做出来。实验室之前没有人做过ＲＡＣＥ，我自己也没有分子生物学背景，担心在实验技术层面出问题。在此请教各位做过ＲＡＣＥ的前辈，３’ＲＡＣＥ实验好不好做，各位都是用的那家公司的试剂盒呢，有没有特别需要注意的事项，大家是多长时间做完的。万分感激～
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我思故我在
1楼 2013-06-19 16:10:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-21 13:54:13
clontech做起来还是蛮快的，不容易出结果，你最好找一个专业的人指导你做，自己做，不管原理都弄不清楚，还会出现各种问题，并且做一次也不便宜~~~
希望可以帮到你，实验顺利~~
ps：验证基因是否表达以及查找表达的基因，为什么非要用race呢，直接定量不久完了吗？疑惑中~~~呵呵
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总有一天我要修改用户名。
4楼2013-06-20 22:42:42
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niil

金虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-21 13:54:24
引用回帖:
5楼: Originally posted by ranranxing at 2013-06-21 11:15:45
谢谢指导啊~可能我表述不清楚，是知道植物组织中存在有功能的酶，但是不确定酶的基因序列，想要找出有表达的基因。做race也是暂定的实验方案，目前还在讨论中。已经将近一个月没做实验了，就是因为不知道下一步怎么 ...

你这种情况，那还是先确定有这个基因，并且获得了部分的基因序列之后再做RACE才好点。
可以先分析下这种酶的同源基因，序列比对后，设计保守引物或者简并引物进行同源克隆，获得部分的cDNA片段之后分析正确了再进行RACE。
没有确定的基因序列，直接做RACE还是很困难的。
实验总有枯燥的一面，但是也有成功的欣喜，需要精心下来，一步一个脚印的去设计分析，楼主加油！
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Stop fighting,let it flow.
6楼2013-06-21 11:29:09
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普通回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 不用盲目抵制啊 他家的东西 还不错啊 2013-06-20 08:28:16
1949stone: 金币+1, 忘记给金币了 sorry 2013-06-20 08:28:29
ranranxing: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-06-24 10:07:19
又是一个苦逼的，3race还是很好做的，takara的试剂盒足够了(虽然不想用日本货)。要是5race的话，clontech

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-06-20 06:21:03
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ranranxing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2013-06-20 06:21:03
又是一个苦逼的，3race还是很好做的，takara的试剂盒足够了(虽然不想用日本货)。要是5race的话，clontech

O(∩_∩)O谢谢啊~心里有点谱了
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我思故我在
3楼2013-06-20 22:11:03
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ranranxing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 137167741 at 2013-06-20 22:42:42
clontech做起来还是蛮快的，不容易出结果，你最好找一个专业的人指导你做，自己做，不管原理都弄不清楚，还会出现各种问题，并且做一次也不便宜~~~
希望可以帮到你，实验顺利~~
ps：验证基因是否表达以及查找表达 ...

谢谢指导啊~可能我表述不清楚，是知道植物组织中存在有功能的酶，但是不确定酶的基因序列，想要找出有表达的基因。做race也是暂定的实验方案，目前还在讨论中。已经将近一个月没做实验了，就是因为不知道下一步怎么进行，又找不到人来带我做实验，只能自己摸索。现在是各种担心和困惑~
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我思故我在
5楼2013-06-21 11:15:45
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z7531242

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-21 13:54:32
ranranxing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-21 13:56:07
3端好做  5端不容易做~~
除了驗證基因表現外---做RACE調全長可能想看是否有Alternative splicing
的現象!!
純屬個人見解，還請各位大師指教^^
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7楼2013-06-21 11:30:20
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ranranxing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by niil at 2013-06-21 11:29:09
你这种情况，那还是先确定有这个基因，并且获得了部分的基因序列之后再做RACE才好点。
可以先分析下这种酶的同源基因，序列比对后，设计保守引物或者简并引物进行同源克隆，获得部分的cDNA片段之后分析正确了再进 ...

谢谢，我看文献中有的也是你说的这种思路，我再好好思考一下。因为实验室之前没有人做这方面，得到的信息很少，不胜感激呀~
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我思故我在
8楼2013-06-21 13:49:26
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乌朵拉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己设计引物做就行，我用的B26引物，末尾18个T，有好的模板，做个巢式PCR几次就出来了，5‘真心不好做，就是买了clontech的盒子我也做了很久没做出来啊
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9楼2013-06-22 11:13:19
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liuwt2008

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般情况下，3‘还是比较好做的，5’不容易拿到。不过RACE因材料不同，难易度也有差异。也听说过5‘好拿，3’难拿的情况，不过这种情况蛮少的。
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10楼2013-06-23 09:27:55
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