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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3’RACE扩增技术
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)

[求助] 3’RACE扩增技术

现在在做3‘RACE扩增目的片段，引物也换了三次了，还是没扩出所需的目的片段而扩出了别的基因，到底是什么原因？请大家帮忙分析下，谢谢！
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1楼 2012-03-06 16:16:21
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
特异性不够吧    既然扩出来说明3·端通用引物没问题   上游引物特异性不好
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amy_fangming
快乐奋斗，创造所有。
2楼2012-03-07 14:53:40
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 跳跳鱼 at 2012-03-07 14:53:40:
特异性不够吧    既然扩出来说明3·端通用引物没问题   上游引物特异性不好

您好！谢谢您的帮助，可是怎么可以使得它的引物特异性强呢?哪些因素会影响目的片段的扩增？
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3楼2012-03-07 15:14:00
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zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是用KIT做的吗 我看我们实验室有人用TAKARA 3’RACE的KIT做的
用OLIGO的那个随机引物就可以做出来
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4楼2012-03-07 21:49:14
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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5楼2012-03-07 21:49:44
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zoeye at 2012-03-07 21:49:14:
你是用KIT做的吗 我看我们实验室有人用TAKARA 3’RACE的KIT做的
用OLIGO的那个随机引物就可以做出来

额，没有吧，只是用了takara公司的PCR所需的buffer，dNTP TAq类的用于PCR的反应液，您所说的OLIGO的那个随机引物我不太懂呢，可以具体说下吗？我很想知道，O(∩_∩)O谢谢
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6楼2012-03-09 12:07:57
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zoeye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by amy_fangming at 2012-03-09 12:07:57:
额，没有吧，只是用了takara公司的PCR所需的buffer，dNTP TAq类的用于PCR的反应液，您所说的OLIGO的那个随机引物我不太懂呢，可以具体说下吗？我很想知道，O(∩_∩)O谢谢

你去TAKARA的官网找 有做3‘race的KIT的 不贵 引物什么的里面都有
具体信息你去官网查吧
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7楼2012-03-09 12:46:39
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zoeye at 2012-03-09 12:46:39:
你去TAKARA的官网找 有做3‘race的KIT的 不贵 引物什么的里面都有
具体信息你去官网查吧

嗯，好的，谢谢您了
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8楼2012-03-09 14:41:57
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-03-07 21:49:44:
我也遇到这个问题了 反转录内参检测没问题 就是扩增出比我预测的小的多的产物

你扩的那个片段大小可以预测的啦，我是不能预测大小的，有点郁闷啦
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9楼2012-03-09 14:43:51
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amy_fangming

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zoeye at 2012-03-09 12:46:39:
你去TAKARA的官网找 有做3‘race的KIT的 不贵 引物什么的里面都有
具体信息你去官网查吧

您好，你所说的做3‘race的KIT是关于PCR方面的还是关于RNA反转录方面的，我在商品目录和官网都没找到关于PCR方面的哇？谢谢
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10楼2012-03-09 15:08:35
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