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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE技术扩增出的3'和5'片段分别与载体连接还是3'和5'片段拼接后与载体连接呢?

看了好多文献,其中有一些文献上写的是RACE技术扩增出的3'和5'片段分别与载体连接,这是为什么啊,目的是啥啊?不是应该是把3'和5'片段拼接后知道全长,然后根据全长设计引物,再PCR扩增,扩增产物纯化后与载体连接吗?
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,非常感谢。 2013-01-04 20:21:13
3'和5'片段分别与载体连接是为了测序,分别验证是否已经获得了目的基因的片段。后续的实验需要根据3'和5'片段测序结果设计引物获得全长,然后再进行下一步的研究。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-01-04 19:39:24
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tiani_tan at 2013-01-04 19:39:24
3'和5'片段分别与载体连接是为了测序,分别验证是否已经获得了目的基因的片段。后续的实验需要根据3'和5'片段测序结果设计引物获得全长,然后再进行下一步的研究。

那下一步研究:即获得全长后,经过PCR扩增,然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊?有什么意义啊
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼2013-01-04 20:20:45
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hch123

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-01-04 20:20:45
那下一步研究:即获得全长后,经过PCR扩增,然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊?有什么意义啊...

可以是保存或者其他的,这要看你实验目的了,如果实验目的不需要做那大可以不做啊。我觉得实验肯定是知道他有意义才会去做得,而不是盲目的去做。
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
4楼2013-01-05 09:32:44
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-01-04 20:20:45
那下一步研究:即获得全长后,经过PCR扩增,然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊?有什么意义啊...

主要是看什么载体了。如果是T载体的话,一方面是对全长进行测序,另一方面是保存。如果是表达载体什么的,那就是表达或者转基因什么的了
5楼2013-01-05 17:51:45
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tiani_tan at 2013-01-05 17:51:45
主要是看什么载体了。如果是T载体的话,一方面是对全长进行测序,另一方面是保存。如果是表达载体什么的,那就是表达或者转基因什么的了...

转基因?意思是如果把cDNA全长与表达载体连接,是用于转基因。如果cDNA全长是和T载体连接的话的作用是进行cDNA全长测序或者是保存。我这么理解的话,对吗?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
6楼2013-01-07 19:07:04
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