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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE技术扩增出的3'和5'片段分别与载体连接还是3'和5'片段拼接后与载体连接呢？

看了好多文献，其中有一些文献上写的是RACE技术扩增出的3'和5'片段分别与载体连接，这是为什么啊，目的是啥啊？不是应该是把3'和5'片段拼接后知道全长，然后根据全长设计引物，再PCR扩增，扩增产物纯化后与载体连接吗？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-01-04 10:01:18
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，非常感谢。 2013-01-04 20:21:13
3'和5'片段分别与载体连接是为了测序，分别验证是否已经获得了目的基因的片段。后续的实验需要根据3'和5'片段测序结果设计引物获得全长，然后再进行下一步的研究。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

崔永霞
2楼2013-01-04 19:39:24
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tiani_tan at 2013-01-04 19:39:24
3'和5'片段分别与载体连接是为了测序，分别验证是否已经获得了目的基因的片段。后续的实验需要根据3'和5'片段测序结果设计引物获得全长，然后再进行下一步的研究。

那下一步研究：即获得全长后，经过PCR扩增，然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊？有什么意义啊
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
3楼2013-01-04 20:20:45
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hch123

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-01-04 20:20:45
那下一步研究：即获得全长后，经过PCR扩增，然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊？有什么意义啊...

可以是保存或者其他的，这要看你实验目的了，如果实验目的不需要做那大可以不做啊。我觉得实验肯定是知道他有意义才会去做得，而不是盲目的去做。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
4楼2013-01-05 09:32:44
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-01-04 20:20:45
那下一步研究：即获得全长后，经过PCR扩增，然后把扩增产物与载体连接的目的是什么啊？有什么意义啊...

主要是看什么载体了。如果是T载体的话，一方面是对全长进行测序，另一方面是保存。如果是表达载体什么的，那就是表达或者转基因什么的了
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5楼2013-01-05 17:51:45
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tiani_tan at 2013-01-05 17:51:45
主要是看什么载体了。如果是T载体的话，一方面是对全长进行测序，另一方面是保存。如果是表达载体什么的，那就是表达或者转基因什么的了...

转基因？意思是如果把cDNA全长与表达载体连接，是用于转基因。如果cDNA全长是和T载体连接的话的作用是进行cDNA全长测序或者是保存。我这么理解的话，对吗？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
6楼2013-01-07 19:07:04
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