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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~RACE扩增不出目的条带
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yspain

新虫 (小有名气)

[求助] 求助~RACE扩增不出目的条带


求助。有一个基因5' 和3' 的目的条带分别是300BP和1000BP左右。但扩出来的条带都不是。设计好几次引物了（引物没问题），都扩不出来。其他基因也是用的相同的试剂盒和方法做的，都得到了目的条带，且测序结果也正确。
求助各位大侠，帮忙出个主意。谢谢啦~！
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1楼 2013-01-03 21:24:42
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小城大宝

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑巢式引物试试 巢式条带可信度还是很高的
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用你的笑容去改变这个世界，别让这个世界改变了你的笑容。
2楼2013-01-04 09:24:46
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检查目标基因是否有形成超结构的趋势
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shine
3楼2013-01-04 15:47:22
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yspain

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小城大宝 at 2013-01-04 09:24:46
跑巢式引物试试 巢式条带可信度还是很高的

巢式引物？以前没大做过呢。现在跑出来的条带，拿去测序，得到的结果BLAST 不是我要的基因呢
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4楼2013-01-04 16:29:54
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yspain

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 15:47:22
检查目标基因是否有形成超结构的趋势

初次做这些实验，不大懂，见笑了！忘指教！万分感谢啊！
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5楼2013-01-04 16:31:23
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小城大宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yspain at 2013-01-04 16:29:54
巢式引物？以前没大做过呢。现在跑出来的条带，拿去测序，得到的结果BLAST 不是我要的基因呢...

巢式引物 就是以已经跑出的PCR产物为模板 再设计一条引物 在已经跑出这个长度范围内的 再跑PCR 如果依然有条带 那么是你目的条带的概率很大 如果不是你的目的条带 巢式PCR没有条带出现
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用你的笑容去改变这个世界，别让这个世界改变了你的笑容。
6楼2013-01-07 09:31:33
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wuping880315

木虫 (著名写手)

折翼的天使

【答案】应助回帖

可能是模板的原因
我也遇到这个问题了
我上个月已经扩出来了
但是现在模板用完了换其他模板却扩不出来了
同一个基因
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生命中多少次的挫折才能成就一次伟大！
7楼2013-01-07 11:13:28
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wuping880315

木虫 (著名写手)

折翼的天使
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小城大宝 at 2013-01-07 09:31:33
巢式引物 就是以已经跑出的PCR产物为模板 再设计一条引物 在已经跑出这个长度范围内的 再跑PCR 如果依然有条带 那么是你目的条带的概率很大 如果不是你的目的条带 巢式PCR没有条带出现...

有时我的巢氏跑完还有三四条带  很搞人人吧  我甚至想设计第三轮了 搞得我
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生命中多少次的挫折才能成就一次伟大！
8楼2013-01-07 11:50:43
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

race的质量一个是看反转后cDNA的质量，还有一个就是引物的好坏。
试剂盒的选择也很重要

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-01-08 12:17:57
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张翕婷

新虫 (初入文坛)
请问大鼠那一块组织PAR-1表达明显？
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10楼2013-01-08 12:50:50
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